【摘要】：目的本實驗主要目的在于利用基因轉染方式,治療常規(guī)藥物療效無效或當前的臨床手法較難達到治愈效果等病癥,予以提出實驗依據(jù),并進一步探討VEGF165基因在組織間轉染后的表達水平及對周圍組織的影響。同時觀察在一定放射量的作用下對周圍組織器官的損傷程度,以評估基因治療前后,損傷組織的變化。 方法1.人源VEGF165質粒的制備,應用逆轉錄-聚合酶鏈反應從人卵巢癌中擴增出目的基因VEGF165序列的cDNA,并將VEGF165的PCR產物經(jīng)BamHI和XbaI雙酶切后連接到真核表達載體pcDNA4-HisMax-C中,然后轉化感受態(tài)大腸桿菌DH5α,實行篩選擴增,并將重組質粒進行基因測序鑒定,最終轉染大鼠咬肌組織檢測其對組織的影響。2.放射損傷動物模型的建立,主要利用直線加速器作為放射源,總劑量為40Gy,分8次完成,觀察放射劑累計量到達后,大鼠的臨床體征,照射區(qū)的皮膚,咬肌軟組織的病理改變。3.利用光鏡、電鏡等手段,觀察大鼠咬肌的細胞組織病理改變及咬肌超微結構的變化。應用RT-PCR檢測放射后TGF-β1 mRNA的變化及h-VEGF165基因轉染后,大鼠咬肌內其mRNA的基因表達和內源性VEGF-A的mRNA水平變化。 結果1.實驗證明成功從人卵巢癌中克隆VEGF165基因,并將其連接至pcDNA4-HisMax-C載體中,經(jīng)測序結果表示pcDNA4-HisMax-C/VEGF165真核表達載體構建成功。2.經(jīng)放療后的咬肌組織,在光鏡下發(fā)現(xiàn)毛細血管內皮嚴重腫脹,大量炎細胞浸潤,組織周圍有大量紅細胞及白細胞,表示經(jīng)放療作用后組織已有一定程度的病理損傷,證實動物放療模型建立成功。3.在RT-PCR檢測中表示,放療后的TGF-β1 mRNA表達水平較正常組織高；VEGF165轉染后,大鼠內源性VEGF-A呈現(xiàn)較高表達。 結論利用大鼠咬肌給予40Gy劑量的放射線照射,成功的模擬患者頜面部在接受大劑量放療后的臨床變現(xiàn)及組織病理學變化。應用基因重組技術成功構建了pcDNA4-HisMax-C/VEGF165真核表達載體并轉染至大鼠咬肌組織內,在光鏡、電鏡和分子生物學檢測下證實其具有對血管內皮有效的修復作用。
【圖文】：

肌纖維組織之間分布較為整齊，毛細血管分布
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R782;R730.5

【參考文獻】

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本文編號：2662900