【摘要】：[目的]建立SD大鼠髁突軟骨細胞(Mandibular condylar chondrocytes,MCC)與脛骨生長板(Tibial growth plate, TGP)軟骨細胞共培養(yǎng)模型,探討共培養(yǎng)環(huán)境對髁突軟骨細胞生物學特性的影響,為髁突生長發(fā)育及軟骨細胞源性組織工程研究提供依據(jù)。 [方法]用Transwell?插入式培養(yǎng)小室間接共培養(yǎng)方式及同一培養(yǎng)瓶直接混合共培養(yǎng)的方式分別對3周齡雌性SD大鼠的髁突軟骨細胞和脛骨生長板軟骨細胞進行非接觸性及接觸性體外共培養(yǎng)。以CFSE熒光染色劑標記直接共培養(yǎng)體系中的髁突軟骨細胞,保證在直接混合共培養(yǎng)條件下仍能有效區(qū)分兩種細胞。設立不同比例細胞共培養(yǎng)實驗組、髁突軟骨細胞獨立培養(yǎng)對照組、脛骨生長板軟骨細胞獨立培養(yǎng)對照組,對各組第二代細胞行組織學觀察及細胞增殖觀測,并采用PT-PCR和免疫組織化學技術檢測軟骨細胞基質(zhì)內(nèi)Ⅰ型膠原(Type Ⅰ collagen, Col Ⅰ)、 Ⅱ型膠原(Type Ⅱ collagen, Col Ⅱ含量的變化。取兩種細胞的原代細胞分別以獨立及等量混合的方式進行無支架離心管培養(yǎng),觀察各組生成組織軟骨的功能情況。 [結果]間接共培養(yǎng)或直接共培養(yǎng)方式下兩種軟骨細胞生長增殖率無差異。與MCC獨立培養(yǎng)對照組相比,不同比例MCC與TGP軟骨細胞直接共培養(yǎng)實驗組細胞基質(zhì)中Ⅰ、Ⅱ型膠原含量,經(jīng)免疫組化及RT-PCR技術檢測,表現(xiàn)為共培養(yǎng)各組Ⅱ型膠原含量均有增加,Ⅰ型膠原含量隨加入TGP軟骨細胞比例的增加而減少。運用無支架離心管培養(yǎng)技術體外培養(yǎng)至2周,MCC和TGP軟骨細胞共培養(yǎng)組培養(yǎng)物及TGP獨立培養(yǎng)組培養(yǎng)物可形成軟骨樣組織結構,經(jīng)Ⅱ型膠原免疫組化染色呈陽性表達；之后混合細胞組由中心區(qū)域開始逐漸失去組織結構,電鏡下觀察到細胞凋亡,細胞器出現(xiàn)水腫、肥大；而TGP組組織結構可維持至第4周,組織形態(tài)無明顯變化,電鏡下觀察到少量鈣化。 [結論]本研究中,單層共培養(yǎng)條件下的MCC和TGP軟骨細胞均生長良好,分泌與合成功能正常,提示共培養(yǎng)環(huán)境對兩種細胞均無病理性損害作用,可提高基質(zhì)內(nèi)Ⅱ型膠原的含量。兩種細胞在無支架離心管立體共培養(yǎng)中,TGP軟骨細胞的加入有助于MCC形成軟骨結構。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R782.4

【參考文獻】

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本文編號：2660144