【摘要】：目的：通過(guò)分析牙周炎患者血漿內(nèi)毒素與冠心病及其危險(xiǎn)因素的相關(guān)性及牙周炎主要致病菌牙齦卟啉單胞菌(P.g)脂多糖(LPS)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)細(xì)胞間連接蛋白VE-cadherin表達(dá)及細(xì)胞增殖和調(diào)亡的影響,探討血漿牙周炎致病菌內(nèi)毒素在牙周炎患者罹患冠心病中的作用及相關(guān)機(jī)制。 方法：1.臨床研究采用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì),于2012年5月-7月在天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院干部保健科進(jìn)行體檢的1089人中,選取牙周炎患者201人,并根據(jù)是否存在冠心病將其分為病例組(牙周炎合并冠心病)和對(duì)照組(牙周炎不合并冠心病),同時(shí)納入43例健康查體對(duì)象設(shè)為空白組。通過(guò)鱟試劑動(dòng)態(tài)濁度法與ELISA法分別測(cè)定血漿內(nèi)毒素及同型半胱氨酸含量,并根據(jù)血漿內(nèi)毒素四分位數(shù)將病例組人群進(jìn)一步分成Q1組(0%且≤25%)、Q2組(25%且≤50%)、Q3組(50%且≤75%)和Q4組(75%且≤100%)。同時(shí),對(duì)全部納入對(duì)象中的男性和老年(年齡≥65歲)亞組人群分別進(jìn)行了進(jìn)一步相關(guān)研究。 2.實(shí)驗(yàn)研究：在體外將P.g菌LPS與HUVEC共培養(yǎng),根據(jù)P.g菌LPS濃度分為空白對(duì)照組、10pg/mL組、50pg/mL組、100pg/mL組及1ng/mL組。分別培養(yǎng)2h、6h、12h及24h后,采用Western blot和RT-PCR分別檢測(cè)VE-cadherin蛋白及mRNA表達(dá)情況。培養(yǎng)28h后采用MTT法及流式細(xì)胞儀分別測(cè)定細(xì)胞增殖活力及凋亡情況,并通過(guò)Western blot檢測(cè)caspase-3激活情況。 結(jié)果：1.在全部入選研究對(duì)象中,3組人群的年齡、內(nèi)毒素、收縮壓(SBP)、總膽紅素(STB)、同型半胱氨酸(Hcy)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。在病例組人群中,舒張壓(DBP)、LDL-C及STB在血漿內(nèi)毒素水平四分位組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中LDL-C隨內(nèi)毒素水平升高呈逐漸增高的趨勢(shì)；血漿內(nèi)毒素與TC和LDL-C之間存在正相關(guān)(r分別為0.438、0.457,P均為0.000),校正年齡因素影響后,它們之間仍然存在正相關(guān)(r分別為0.349、0.423,P分別為0.003、0.000)。血漿HCY及內(nèi)毒素水平增加、年齡增長(zhǎng)和舒張壓升高可能是牙周炎患者罹患冠心病的促進(jìn)因素,而女性性別優(yōu)勢(shì)可能是其抑制因素。 2.在男性亞組中,3組人群的年齡、內(nèi)毒素、SBP、DBP、STB、Hey、TC、LDL-C、VLDL-C、HDL-C差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在男性病例組人群中,不同血漿內(nèi)毒索水平四分位組間STB的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；血漿內(nèi)毒素與TC和LDL-C之間存在正相關(guān)(r分別為0.427、0.452,p均小于0.000),校正年齡因素影響后,它們之間J仍然存在正相關(guān)(r分別為0.361、0.454,P分別為0.006、0.000)。血漿Hcy及內(nèi)毒素水平增加和年齡增長(zhǎng)可能是促進(jìn)男性牙周炎患者罹患冠心病的影響因素,而血漿Fbg水平增加可能是其抑制因素。 3.在老年亞組中,3組人群的年齡、內(nèi)毒素、SBP、STB、Hcy、TC、LDL-C、 HDL-C差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在老年病例組人群中,STB和DBP在血漿毒素水平四分位組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；血漿內(nèi)毒素與TC和LDL-C之間存在正相關(guān)(r分別為0.418、0.443,P均小于0.000),校正年齡因素影響后它們之間仍然存在正相關(guān)(r分別為0.320、0.399,P分別為0.008、0.001)。老年牙周炎患者罹患冠心病的易患因素可能是血.漿Hcy及內(nèi)毒素水平增加,而其抑制因素可能是女性性別優(yōu)勢(shì)。 4.濃度為1ng/mL時(shí),P.g菌LPS能以時(shí)間依賴(lài)方式下調(diào)HUVEC細(xì)胞VE-cadherin蛋白及mRNA表達(dá)；100pg/mL濃度的P.g菌LPS僅在處理24h后才表現(xiàn)出上述下調(diào)作用；而10pg/mL和50pg/mL濃度的P.g菌LPS對(duì)HUVEC細(xì)胞VE-cadherin蛋白及mRNA表達(dá)無(wú)明顯影響。 5. HUVEC細(xì)胞增殖活力在10pg/mL組與空白對(duì)照組之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),細(xì)胞凋亡和caspase-3激活程度在這兩組間也沒(méi)有明顯差異；50pg/mL組、100pg/mL組和1ng/mL組HUVEC細(xì)胞增殖活力明顯低于空白對(duì)照組及10pg/mL組(P0.01),并且隨著P.g菌LPS濃度增加,HUVEC細(xì)胞增殖活力逐漸減低,而HUVEC細(xì)胞發(fā)生凋亡及caspase-3激活程度卻逐漸增加。 結(jié)論：1.血漿中牙周炎致病菌內(nèi)毒素水平增加可能是促使牙周炎患者罹患冠心病的影響因素,并且牙周炎致病菌內(nèi)毒素可能是通過(guò)與血.漿TC、LDL-C和Hcy及年齡增長(zhǎng)等因素協(xié)同作用共同促進(jìn)冠心病的發(fā)生與發(fā)展。 2.牙周炎主要致病菌P.g菌脂多糖可能是通過(guò)抑制HUVEC細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞凋亡的機(jī)制,直接引起血管內(nèi)皮損傷,從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生發(fā)展。 3.P.g菌LPS可能不是通過(guò)直接影響HUVEC細(xì)胞VE-cadherin表達(dá)的途徑增加內(nèi)皮細(xì)胞間通透性,以利于動(dòng)脈粥樣硬化病變的形成。 4.P.g菌LPS可能是通過(guò)激活caspase-3途徑誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞產(chǎn)生凋亡的。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R541.4;R781.42

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2657462