【摘要】： 侵襲性牙周炎(aggressive periodontitis,AgP)是發(fā)生于全身健康者的進展迅速、有家族聚集性、不同于慢性牙周炎的一類牙周炎,是造成健康年輕者迅速失牙的最主要因素之一。AgP臨床界定標(biāo)準(zhǔn)模糊,病因尚未完全清楚。雖然,某些具有特殊致病毒力的微生物是AgP發(fā)病的重要致病因子,但越來越多的證據(jù)表明AgP是一個多因素疾病。包括宿主易感因素、環(huán)境危險因素和致病微生物等,其中宿主易感因素主要受易感遺傳基因影響,且研究認(rèn)為AgP患者可能存在細(xì)胞免疫應(yīng)答功能障礙。本實驗室前期研究通過基因芯片篩選獲得了48個顯著差異表達的基因,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,AgP患者外周血白細(xì)胞中的部分基因表達上調(diào),還有一部分基因表達下調(diào)。由于基因芯片檢測可能存在假陽性或者假陰性的結(jié)果,為了驗證芯片檢測的結(jié)果以及從中找到與侵襲性牙周炎相關(guān)的特異性基因,本研究從中挑選出與免疫反應(yīng)緊密關(guān)聯(lián)的5個基因進行研究,即TPD52L2、PTHLH、DNAJC11、CD881、和MARK3進行熒光定量PCR,對基因芯片的結(jié)果進一步驗證,以推進后期侵襲性牙周炎的病因及發(fā)病機制的研究發(fā)展。 目的:對TPD52L2、PTHLH、DNAJC11、CD881、和MARK3五個在基因芯片檢測結(jié)果中表達異常的基因進行熒光定量PCR,以檢測它們的基因表達水平,從而驗證基因芯片檢測結(jié)果,推進后期侵襲性牙周炎的病因及發(fā)病機制的研究進展。 方法:分別抽取10例AgP患者5ml外周靜脈血,以健康者作為對照,分離白細(xì)胞,提取RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后,利用熒光定量PCR技術(shù)檢測5個基因的表達水平。 結(jié)果:同健康對照者相比,發(fā)現(xiàn)在侵襲性牙周炎患者中,TPD52L2、DNAJC11和PTHLH基因的研究結(jié)果與基因芯片的結(jié)果一致,均表達上調(diào)。TPD52L2在AgP外周血白細(xì)胞中表達上調(diào)了9.71倍,PTHLH上調(diào)了4.47倍,DNAJC11上調(diào)了6.36倍。而CD881的熒光定量PCR檢測顯示其在AgP外周血白細(xì)胞中表達上調(diào)5.62倍,與基因芯片下調(diào)的結(jié)果差異較大。MARK3則與基因芯片結(jié)果相比沒有顯著性差異。 結(jié)論:AgP患者外周血白細(xì)胞中基因表達水平的差異可能與AgP的發(fā)病機理有關(guān)。AgP患者的DNAJC11、PTHLH、TPD52L2表達水平的升高可能與AgP的基因易感性有關(guān),但其確切相關(guān)性還有待進一步研究。
【圖文】：

口腔X光片圖

(見圖2)由于SYBR熒光染料物質(zhì)具有抑制Taq酶活性的特點，故而進行了最佳Mg2+濃度、sYBR一GreenI熒光染料濃度的優(yōu)化。 FFFF熒光物質(zhì) 質(zhì)!!!·熱變性-丫尸了F「「 「一 一」一一上土~L一土-~-」一LJesJ一」~」一」J一」一上上 pppoIYmeraser廣 廣 ---...r.?.，一「「 「222·引物退火二「;’{}一I-一 111一 一333.延伸反應(yīng)二二二二二勺 勺 111111!11111圖2熒光定量PCR原理對Mg2+濃度和sYBR一Greenl熒光染料濃度進行了兩因素三水平的設(shè)計。當(dāng)某一反應(yīng)組達到的Ct值(即熒光信號增強到某一閉值時，反應(yīng)管所用的循環(huán)次數(shù))較小，而熒光強度較高時，說明了相對其它反應(yīng)組而言，在模版量相同的情況下，，該組用較少的循環(huán)次數(shù)就可達到閉值。其敏感性相對較高，因而該反應(yīng)所對應(yīng)體系為此實驗優(yōu)化的相對“最佳”水平。(見表l)表l兩因素三水平的析因設(shè)計表(反應(yīng)主要影響因素和反應(yīng)水平) A1AllAlllBI B11 A1Bl A11BlAlllBI A1BllA11B11 AlllB11Blll A1BlllA11BlllAlllBlll注:A、B分別代表反應(yīng)體系中兩種反應(yīng)組分(關(guān)鍵影響因素);I、n、nl分別代表反應(yīng)組分的低、中、高三種濃度。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R781.4

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

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本文編號：2650361