發(fā)布時(shí)間：2020-04-30 22:08

【摘要】： 近年來(lái),牙周病與心血管疾病的關(guān)系逐漸受到人們的重視,流行病學(xué)研究表明牙周病與心血管疾病密切相關(guān),牙周病可能是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素之一。動(dòng)脈粥樣硬化是一種波及大、中型血管的疾病,現(xiàn)在普遍認(rèn)為免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起一定作用。近期研究表明,冠心病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制與感染引發(fā)的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。牙周病是人類最常見(jiàn)的感染性疾病之一,其導(dǎo)致的局部和全身免疫反應(yīng)目前已被認(rèn)為是發(fā)病的主要病理機(jī)制。大量的流行病學(xué)調(diào)查資料表明,冠心病和外周動(dòng)脈粥樣硬化的患者口腔衛(wèi)生不良率和牙周炎患病率均較高�；A(chǔ)研究已經(jīng)顯示,脂多糖-單核細(xì)胞-細(xì)胞因子(前列腺素E2、血栓素A2、白細(xì)胞介素-1β、腫瘤壞死因子α)之間的相互作用可能是牙周炎和動(dòng)脈粥樣硬化相互聯(lián)系的生物學(xué)基礎(chǔ)。因此,本研究旨在從細(xì)胞生物學(xué)的角度入手,通過(guò)培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),與牙齦卟啉單胞菌(Porphysomanas gingivalis, P.g)共同孵育,觀察牙齦卟啉單胞菌對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)活性的影響和分析關(guān)鍵細(xì)胞因子含量的變化,從而為牙周炎與冠心病之間的相關(guān)發(fā)病機(jī)制提供佐證。 方法:經(jīng)消化法培養(yǎng)獲得人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,厭氧培養(yǎng)獲得牙齦卟啉單胞菌,通過(guò)MTT法檢測(cè)牙齦卟啉單胞菌對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響,凋亡試劑盒檢測(cè)牙齦卟啉單胞菌對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響,掃描電鏡和透射電鏡觀察牙齦卟啉單胞菌對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響。ELISA法檢測(cè)牙齦卟啉單胞菌對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-18和CRP的影響。 結(jié)果:1.P.g和大腸桿菌LPS均能抑制HUVECs的增殖(P0.02),且P.g對(duì)HUVECs的抑制作用較大腸桿菌LPS更為明顯(P0.05)。P.g感染HUVECs3 h后即可見(jiàn)部分細(xì)胞黏附性下降,極少部分細(xì)胞開(kāi)始脫落固縮。隨著時(shí)間的延長(zhǎng),這種作用更加明顯,24 h后凋亡檢測(cè)顯示,正常細(xì)胞組單個(gè)高倍視野下見(jiàn)一個(gè)或是無(wú)細(xì)胞凋亡,平均凋亡率2%。而P.g感染組可見(jiàn)部分細(xì)胞凋亡,計(jì)算三個(gè)高倍視野,細(xì)胞平均凋亡率為20%左右。通過(guò)掃描電鏡和透射電鏡對(duì)P.g侵入HUVECs的觀察顯示,P.g的主要菌毛在侵襲和黏附內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)程中起重要作用,P.g通過(guò)胞吞途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的侵入。 2.HUVECs自身表達(dá)少量的IL-18和C反應(yīng)蛋白;P.g劑量依賴性增強(qiáng)HUVECs產(chǎn)生IL-18蛋白和C反應(yīng)蛋白的水平,IL-18蛋白水平和C反應(yīng)蛋白的水平在P.g刺激后的4 h開(kāi)始增加,在8 h、12 h和24 h繼續(xù)增加,且相同濃度作用下HUVECs分泌CRP的量明顯高于其分泌IL-18的量。P.g ATCC33277、P.g381均可以誘導(dǎo)HUVECs分泌IL-18、CRP,其分泌的量明顯高于空白對(duì)照組(P0.05),但P.g ATCC33277、P.g381之間誘導(dǎo)分泌的量無(wú)明顯差別。 結(jié)論:P.g能明顯抑制HUVECs的增殖,增加HUVECs的凋亡;P.g可能通過(guò)胞吞途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的侵入。P.g劑量和時(shí)間依賴性增強(qiáng)HUVECs表達(dá)IL-18和CRP。P.g對(duì)HUVECs的作用可能在心血管疾病病理反應(yīng)中有重要意義。
【圖文】：

原代培養(yǎng)的HUVECs細(xì)胞(×200)

HUVECs抗人Ⅷ因子多克隆
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R78

【參考文獻(xiàn)】

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