【摘要】：研究目的： 1．在大量查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，構(gòu)建SD（Sprague-Dawley）雌鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型，并在不同的雌激素水平干預(yù)下，分別觀(guān)察大鼠牙周炎的發(fā)展；通過(guò)HE染色觀(guān)察大鼠組織形態(tài)學(xué)的改變，為研究雌激素對(duì)牙周炎發(fā)展的影響提供前提和實(shí)驗(yàn)條件。 2．對(duì)不同雌激素水平下大鼠血液指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較與分析；并對(duì)其牙周炎病理變化過(guò)程中HSP27的表達(dá)及變化狀況進(jìn)行觀(guān)察，探討牙周炎發(fā)病機(jī)制中HSP27所起的作用及意義。 研究方法： 1．構(gòu)建內(nèi)源性雌激素缺乏的大鼠模型：取健康清潔級(jí)雌性SD大鼠33只（由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），鼠齡26周左右，體重約240g左右，，牙列完整，咬合正常，無(wú)齲壞及牙周病。隨機(jī)分為3組，分別為：SHAM組（11只），OVX組（11只），OVX+E組（11只），在大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后，對(duì)各組行假手術(shù)或行雙側(cè)卵巢切除手術(shù)。OVX+E組在術(shù)后第二天皮下注射17β—雌二醇，規(guī)格為20μg/kg，三天一次。OVX組在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不以任何形式補(bǔ)充17β—雌二醇。 2．構(gòu)建SD雌鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)物模型：以上三組在術(shù)后第三周行牙周結(jié)扎術(shù)。使用正畸結(jié)扎絲對(duì)大鼠左側(cè)上頜第一磨牙進(jìn)行結(jié)扎，打結(jié)于腭側(cè)，并將結(jié)扎處置于大鼠齦下。右側(cè)大鼠牙齒留作對(duì)照，不做處理。于牙周結(jié)扎術(shù)后第2、4、6周觀(guān)察各組大鼠牙周炎發(fā)展的臨床表現(xiàn)，并分別對(duì)三組隨機(jī)抽取3只大鼠行內(nèi)眥靜脈取血后處死。同時(shí)取各組大鼠雙側(cè)上頜牙槽骨標(biāo)本。 3．檢測(cè)階段：內(nèi)眥血常規(guī)化驗(yàn)雌激素含量，觀(guān)察雌激素水平的變化；大鼠雙側(cè)上頜骨標(biāo)本經(jīng)脫鈣，包埋，組織切片，H.E染色等過(guò)程，在光學(xué)顯微鏡觀(guān)察牙周組織病理改變，并加入HSP27抗體，在免疫組化染色后電子掃描顯微鏡觀(guān)察HSP27的表達(dá)范圍及強(qiáng)度，并進(jìn)行分析。 研究結(jié)果： 1．體重變化結(jié)果：本課題三組雌鼠的體重在實(shí)驗(yàn)前及手術(shù)后一周組間均無(wú)顯著差異；在假手術(shù)或雙側(cè)卵巢切除手術(shù)后第二周至實(shí)驗(yàn)結(jié)束每周OVX組大鼠體重的增長(zhǎng)值較SHAM組和OVX+E組高，OVX組大鼠體重增長(zhǎng)速度快；在假手術(shù)或雙側(cè)卵巢切除手術(shù)后第二周至實(shí)驗(yàn)結(jié)束SHAM組和OVX+E組每周大鼠體重的增長(zhǎng)值無(wú)顯著差異。 2．本課題成功構(gòu)建內(nèi)源性雌激素缺乏的大鼠模型。在牙周結(jié)扎術(shù)后2、4、6周對(duì)三組雌鼠內(nèi)眥血常規(guī)化驗(yàn)，結(jié)果表明，OVX組的雌激素水平的降低程度在各個(gè)時(shí)點(diǎn)差異明顯；SHAM組和OVX+E組的雌激素水平組間與組內(nèi)在各個(gè)時(shí)點(diǎn)無(wú)顯著差異； OVX組的雌激素水平與SHAM組和OVX+E組各個(gè)時(shí)點(diǎn)差異明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后大鼠尸解發(fā)現(xiàn)OVX組大鼠子宮較SHAM組明顯萎縮，也無(wú)法找到卵巢，說(shuō)明卵巢切除術(shù)可成功建造雌激素缺乏模型。但OVX+E組子宮較SHAM組有不同程度的增粗與肥大，可見(jiàn)雌激素對(duì)子宮有直接作用。并不一定與卵巢存在與否有直接關(guān)系。 3．本課題成功構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)物模型。三組雌鼠在牙周結(jié)扎術(shù)前后飼養(yǎng)環(huán)境不變，仍為12h日夜更替，飼料均為大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料，各組大鼠自由飲水。在牙周結(jié)扎術(shù)后2w、4w、6w觀(guān)察各組大鼠牙周炎的臨床表現(xiàn)，并取標(biāo)本進(jìn)行HE染色切片觀(guān)察。結(jié)果表明，在牙周結(jié)扎術(shù)后2w各組大鼠牙齦略顯紅色，探診有輕度出血等狀況，各組在2w、4w、6w牙周探診程度加深，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中OVX組較SHAM組和OVX+E組牙周炎程度較重。實(shí)驗(yàn)表明，本課題成功構(gòu)建了雌鼠牙周炎模型。 4．HSP27的表達(dá)結(jié)果：在牙周炎發(fā)展的過(guò)程中，雌激素的水平對(duì)HSP27的表達(dá)有著不同程度的影響。牙周炎發(fā)展的早、中期各組大鼠牙周組織中HSP27表達(dá)高于同體對(duì)側(cè)正常水平；牙周炎晚期各組大鼠牙周組織HE切片中HSP27表達(dá)與同體對(duì)側(cè)正常水平無(wú)顯著差異。雌激素治療對(duì)HSP27表達(dá)的影響表現(xiàn)為，在牙周炎早、中期雌激素水平越低，牙周組織中HSP27表達(dá)高于同體對(duì)側(cè)正常水平，牙周炎發(fā)展的晚期各組大鼠牙周組織中HSP27表達(dá)與同體對(duì)側(cè)正常水平無(wú)顯著差異。本課題實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，雌激素對(duì)牙周組織中HSP27表達(dá)的影響是通過(guò)干預(yù)牙周炎的進(jìn)程為中介的，但起作用機(jī)制還有待探討。 結(jié)論： 1．雌激素水平的高低會(huì)對(duì)大鼠的體重會(huì)產(chǎn)生影響，隨著時(shí)間的推移，大鼠雌激素缺乏或水平較低將會(huì)會(huì)引起大鼠體重的快速增長(zhǎng)。 2．雌激素水平高低會(huì)影響牙周炎的病理發(fā)展過(guò)程，大鼠內(nèi)源性的雌激素缺乏會(huì)加重牙周炎的程度。 3．在牙周炎發(fā)展的早、中期HSP27的表達(dá)與炎癥程度呈正相關(guān)，與雌激素水平呈負(fù)相關(guān)。在牙周炎發(fā)展的晚期，HSP27的表達(dá)趨于正常水平。HSP27表達(dá)水平變化的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R781.42

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2643217