【摘要】：目的：(1)在新西蘭大白兔頜面部種植VX2瘤株,且結合CT表現(xiàn)和病理學切片檢查,建立頭頸部腫瘤的動物模型。(2)對新西蘭大白兔頜面部腫瘤組織細胞端粒酶蛋白催化亞基(hTERT)的活性檢測,探討細胞周期指標在腫瘤組織中的生物學特性。 方法：(1)實驗分組：實驗共分為2組,新西蘭大白兔共30只,其中A組為實驗組,共15只新西蘭大白兔分別編號為A組：T1、T2---T14、T15；B組為對照組,共15只新西蘭大白兔分別編號為B組：T1、T2---T14、T15；且每只均做好標記。(2)實驗方法：將兔VX2瘤株細胞懸液接種到A組兔左側頜面部咬肌中,建立左側頜面部動物腫瘤模型,將生理鹽水注射到B組兔左側頜面部咬肌中,作為對照組。利用TRAP法(Telomeric Repeat Amplification Protocol)對兔腫瘤組織細胞端粒酶蛋白催化亞基(hTERT)的活性檢測。其陽性結果在凝膠電泳上顯示相隔6bp的梯狀條帶,條帶的數(shù)量及深淺表示了端粒酶活性的大小。利用細胞內DNA能夠和熒光染料(如碘化丙啶--PI)結合的特性,細胞DNA含量表達來檢測兔頜面部腫瘤組織中細胞周期指標(SPF、PI和5cEx)的表達。(3)統(tǒng)計學分析：本實驗采用SPSS13.0進行統(tǒng)計學分析,實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示,多組見比較用方差分析(F檢驗),方差齊則采用t檢驗進行兩兩比較,方差不齊則采用t’檢驗進行兩兩比較,以P0.05為差異顯著。 結果：(1)頭頸部腫瘤動物模型的建立：于VX2瘤細胞懸液接種兔A組和生理鹽水注射兔B組第5周隨機抽取,至長江大學附屬第一醫(yī)院行左側頜面部CT掃描,A組左側咬肌內可見腫塊,邊界清晰,B組未見腫塊生成。于接種起第5周隨機將將A組和B組左側頜面部組織切除,行病理切片可見A組：取下的腫瘤組織行病理切片蘇木精-伊紅染色,病理證實為鱗癌,頜面部腫瘤組織與肌纖維交界,肌纖維腫瘤浸潤及頜面部腫瘤組織,其可見病理性核分裂像；B組為正常左側頜面部咬肌纖維。(2)TRAP-PCR法對兔腫瘤組織細胞端粒酶蛋白催化亞基(hTERT)的活性檢測：端粒酶蛋白催化亞基(hTERT)陽性表達在電泳凝膠上呈現(xiàn)6bp的梯形條帶圖譜,而端粒酶陰性標本不出現(xiàn)此圖譜,腫瘤組織細胞端粒酶活性表達呈現(xiàn)陽性,其中,第3條帶是實驗組A組T2細胞的端粒酶活性表現(xiàn)最強,且條帶最為清晰,在實驗中被用來做為陽性對照組,第1條帶為分子量標記DNA Markers,片段顯示清晰,第8條帶為陰性對照,為裂解緩沖液對照無模板的自身陰性對照組,本次實驗通過TRAP法檢測實驗組A組15例頜面部鱗狀細胞癌組織中檢測出的hTERT活性表達陽性為13例,陽性率為86.6%。B組15例頜面部正常咬肌組織中檢測出的hTERT活性表達陽性為2例,陽性率為13.3%。本實驗顯示,在頜面部惡性腫瘤組織中端粒酶蛋白催化亞基(hTERT)活性明顯高于正常組織(P0.01),由此可以得出端粒酶活性的定量檢測可以區(qū)分頜面部惡性腫瘤組織和正常組織,本研究進一步證實了端粒酶的活性表達與頜面部惡性腫瘤發(fā)生的相關性。(3)端粒酶蛋白催化亞基(hTERT)在實驗兔頜面部腫瘤組織中細胞周期指標的檢測：本次動物實驗模型中A組15例為頜面部鱗狀細胞癌,B組15例正常咬肌組織中均未異倍體出現(xiàn),且SPI、PI和5cEx在實驗兔A組的頜面部惡性腫瘤組的均值為：14.4%、19.58%和1.58%,相比較實驗兔B組的正常頜面部咬肌組的均值：3.33%、4.13%和0.02%有很明顯的升高,差異顯著。且SPF和PI兩組細胞周期指數(shù)提示A組頜面部惡性腫瘤部位的細胞增生程度高,與B組正常頜面部咬肌組織存在著明顯的不同,表明頜面部惡性腫瘤異倍體與正常組織二倍體相比(P0.01),惡性腫瘤組織與正常組織中5cEx存在的差異明顯(P0.05),且PI、SPF在二倍體腫瘤、異倍體腫瘤和正常咬肌組織相比,高出較明顯(P0.01)。 結論：(1)通過采取注射兔VX2腫瘤組織細胞懸液而建立的兔頜面部惡性腫瘤模型,具有成瘤率高、腫瘤生長周期性短,穩(wěn)定性高,操作簡便等特點。(2)在兔頜面部惡性腫瘤組織中端粒酶蛋白催化亞基(hTERT)活性明顯高于正常組織,端粒酶活性的定量檢測可作為頜面部惡性腫瘤的診斷指標之一。(3)在兔頜面部惡性腫瘤組織中G1/S期細胞周期中可檢測出端粒酶蛋白催化亞基(hTERT)活性表達,S期時hTERT活性表達最為顯著,G2/M期中幾乎檢測不出時hTERT活性表達。
【學位授予單位】：長江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

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2 應海岳;吳海濤;;頭頸部惡性腫瘤頸淋巴結轉移的影像學早期診斷[J];中國眼耳鼻喉科雜志;2005年05期

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4 李玉潔,張貴祥,趙國旗,胡運勝,趙京龍,周根泉;頜面部VX2腫瘤DCE-MRI與乏氧程度及VEGF表達的相關性研究[J];中國醫(yī)學影像技術;2005年11期

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本文編號：2633429