【摘要】：篩查與口腔黏膜白斑(oral leukoplakia,OLK),OLK癌變和口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)發(fā)生相關(guān)的陽(yáng)性表達(dá)基因,進(jìn)一步探討口腔白斑發(fā)生的分子機(jī)制,嘗試建立OLK、OLK癌變傾向和OSCC的基因診斷的可行方法。 采用SuperArray腫瘤基因芯片(OHS-802)檢測(cè)口腔正常組織、口腔癌前病變組織和OSCC組織腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)差異。進(jìn)一步運(yùn)用RT-PCR、Real Time PCR法的方法證實(shí)“正常組織→OLK組織→OSCC組織”連續(xù)遞增2倍以上或遞減2倍以下的基因。將這些基因作為OLK組織癌變的候選基因,解釋與口腔癌前病變致惡變的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系�；蛐酒瑢�(shí)驗(yàn)采用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒(SuperArray Bioscience,Catalog Number D-01),X-射線膠片曝光,使用芯片公司提供的綜合型GEArray表達(dá)分析配套軟件(GEArray Expression Analysis Suite)進(jìn)行芯片數(shù)據(jù)分析。RT-PCR電泳結(jié)果采用Kodak凝膠成像分析系統(tǒng)對(duì)部分基因的表達(dá)水平進(jìn)行半定量,然后將其與芯片分析的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行相似性分析。ACP-2、BCL-2、SOCS-3、CLK-3、CTNNB-1、FKBP-8、GDF-15、NF-1、XRCC-1等9個(gè)候選基因的表達(dá)量均與組織的癌變程度存在較好的線性關(guān)系,R20.8,提示這些基因表達(dá)變化可能是口腔正常黏膜組織經(jīng)OLK轉(zhuǎn)變?yōu)榘┙M織的驅(qū)動(dòng),可作為OLK組織、OSCC組織和口腔正常黏膜組織診斷的分子標(biāo)志候選基因。 本文研究?jī)?nèi)容包括:(1)OLK組織中腫瘤相關(guān)基因表達(dá)特點(diǎn)研究(2)OLK組織癌變標(biāo)志性基因的篩查(3)標(biāo)志性基因在口腔黏膜病基因診斷中的應(yīng)用。 1.OLK組織中腫瘤相關(guān)基因表達(dá)特點(diǎn) OLK、OLK癌變傾向和OSCC發(fā)生相關(guān)的陽(yáng)性表達(dá)基因的研究是探討白斑癌變的發(fā)生機(jī)制的重要基礎(chǔ)。該部分內(nèi)容根據(jù)組織間基因表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)值的比值,將表達(dá)量上調(diào)2倍或下調(diào)2倍的基因確定為陽(yáng)性候選基因。結(jié)果顯示,在檢測(cè)的440個(gè)腫瘤相關(guān)基因中有49個(gè)基因表達(dá)水平下調(diào)2倍以上,有157個(gè)基因表達(dá)上調(diào)2倍以上,共206個(gè)陽(yáng)性基因,其分布于腫瘤發(fā)生的各個(gè)已知環(huán)節(jié),提示這些基因表達(dá)變化可能是口腔粘膜組織白斑化和OLK癌化的驅(qū)動(dòng)。OLK及其惡變,乃至OSCC的發(fā)生與細(xì)胞周期調(diào)控基因和細(xì)胞增殖分化基因關(guān)系密切,其中有53個(gè)基因在細(xì)胞周期調(diào)控方面的表達(dá)變化在兩倍以上(上調(diào)或下調(diào)),有65個(gè)基因在細(xì)胞增殖分化方面的表達(dá)變化在兩倍以上。 經(jīng)RT-PCR結(jié)果證實(shí),正常組織和OLK組織間CTNNB-1、GDF-15、FKBP-8、NF-1四個(gè)基因的表達(dá)差異和SupperArray芯片獲得的結(jié)果一致。實(shí)驗(yàn)還證實(shí)OLK組織和OSCC組織間,在口腔粘膜正常組織和OSCC組織間CLK-3、CTNNB-1、GDF-15、FKBP-8、SOCS-3、NF-1、BCL-2、XRCC-1、ACP-2九個(gè)候選基因的表達(dá)和SupperArray芯片結(jié)果一致。 白斑發(fā)生的分子機(jī)制較為復(fù)雜,特別是與細(xì)胞周期調(diào)控基因和細(xì)胞增殖分化基因關(guān)系密切。本研究為深入研究口腔黏膜白斑的發(fā)生機(jī)制和標(biāo)志性基因探針的篩查提供有價(jià)值的數(shù)據(jù)。 2 OLK組織癌變標(biāo)志性基因的篩查 在對(duì)口腔正常組織、口腔癌前病變組織和OSCC組織的腫瘤相關(guān)基因表達(dá)差異的研究中發(fā)現(xiàn),僅有3個(gè)基因(ACP-2、BCL-2、SOCS-3)表達(dá)水平連續(xù)下調(diào)2倍以上,有6個(gè)基因(CLK-3、CTNNB-1、FKBP-8、GDF-15、NF-1、XRCC-1)表達(dá)連續(xù)上調(diào)2倍以上,且ACP-2等9個(gè)標(biāo)志性基因的表達(dá)量均與組織的癌變程度存在較好的線性關(guān)系,R20.8,提示這些基因表達(dá)水平的變化可能是口腔正常黏膜組織經(jīng)OLK轉(zhuǎn)變?yōu)榘┙M織的驅(qū)動(dòng)基因�？勺鳛镺LK組織、OSCC組織和口腔正常黏膜組織診斷的分子標(biāo)志。 白斑癌變的分子機(jī)制較為復(fù)雜,與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),DNA損傷與修復(fù),癌基因與抑癌基因等多種作用機(jī)制相關(guān)。本研究為深入研究口腔黏膜白斑癌變的機(jī)制和標(biāo)志性基因探針的篩查奠定了基礎(chǔ)。 3標(biāo)志性基因在口腔黏膜病基因診斷中的應(yīng)用 目前,對(duì)OLK的診斷以組織病理學(xué)檢查為主,該方法具有對(duì)患者的組織黏膜破壞面積大、診斷不準(zhǔn)確的缺點(diǎn)。為了將候選基因用于口腔黏膜病中OLK,OLK癌變和OSCC的基因診斷,本研究對(duì)CLK-3、CTNNB-1、GDF-15、FKBP-8、SOCS-3、NF-1、BCL-2、XRCC-1、ACP-2等9個(gè)基因進(jìn)行了RT-PCR半定量研究。 采用兩類Fisher判別法建立了口腔黏膜組織是否為OLK組織的判別公式為:Y=-27.503 +0.094XGDF-15 -0.122XNF-1+0.368XSOCS-3,確定了判別界值Yc=-1.186,即大于-1.186為非OLK組織,小于-1.186為OLK組織。采用Cross-validated(a)法進(jìn)行驗(yàn)證性判別,總判別符合率為100%,交互判別符合率為100.00%,靈敏度為100%,特異度為100%。建立了口腔黏膜組織癌變趨勢(shì)大小的判別公式:Y1=-16.811+0.477XNF-1+0.540XACP-2-0.543XCTNNB-1-0.089XSOCS-3;Y2=-35.832+0.073XNF-1-0.074XACP-2+0.306XCTNNB-1+0.191XSOCS-3。判別界值Yc1=8.6513;Yc2=0.1117,即大于8.6513可判斷該組織為無(wú)癌變,介于0.1117和8.6513之間為輕度癌變組織,小于0.1117為癌變組織。進(jìn)一步采用了Cross-validated(a)法進(jìn)行了評(píng)價(jià),總判別符合率為100%;交互判別符合率為100.00%,靈敏度為100%,特異度為100%。建立了口腔黏膜組織是否為OSCC組織的判別公式為:Y=-16.099+0.044XGDF-15-0.082XBCL-2+0.234XCTNNB-1,確定了判別界值Yc=0,即大于0為非OSCC組織,小于0為OSCC組織。采用Cross-validated(a)法進(jìn)行驗(yàn)證性判別,總判別符合率為100%,交互判別符合率為91.67%,靈敏度為85.71%,特異度為100%。 本研究為臨床OLK、OSCC的基因診斷和口腔黏膜組織癌變趨勢(shì)的基因診斷的建立提供了簡(jiǎn)便易行的操作方法。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2631311