發(fā)布時間：2020-04-13 21:40

【摘要】：齲病是人類最常見的細菌感染性疾病之一。變形鏈球菌是人類齲病的始發(fā)因素,通過對牙面的粘附、產(chǎn)酸及耐酸表現(xiàn)其致齲性,是目前公認的最重要的致齲菌。氟化物是目前最有效的防齲致劑,因此得到在全世界范圍內(nèi)的廣泛應(yīng)用。然而為了提高并維持菌斑內(nèi)較高的氟化物水平,更好的預(yù)防和治療齲病,局部應(yīng)用氟化物的濃度和次數(shù)逐漸增加,將有可能導(dǎo)致耐氟菌株的選擇性生長。耐氟菌株與親代菌株相比具有更強的耐氟性、產(chǎn)酸和耐酸能力,致齲能力也隨之增強。變形鏈球菌耐氟菌株耐酸能力的提高,是其致齲性提高的一個重要因素,對于耐酸相關(guān)基因的研究,一直是國內(nèi)外學(xué)者研究的熱門。目前本課題組在前期的研究中已檢測出變形鏈球菌耐氟菌株中耐酸相關(guān)基因ffh、dgk、dltc等發(fā)生突變,突變的具體位置也已經(jīng)清楚,結(jié)果已登陸美國GenBank。本實驗以變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因dfp和dnaK為目的基因。采用體外人工誘導(dǎo)法誘導(dǎo)變形鏈球菌耐氟菌株,根據(jù)GenBank發(fā)表的變形鏈球菌耐酸相關(guān)基因dfp和dnaK的序列,根據(jù)引物設(shè)計原則,在保守區(qū)分別設(shè)計引物進行PCR,獲得目的基因片段,用pMD18-T載體進行T/A連接,轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細胞構(gòu)建重組質(zhì)粒,交由生化公司進行測序鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因dfp沒有發(fā)生突變,而dnaK與GenBank報告序列不同,有3個堿基發(fā)生突變。突變發(fā)生的位點分別在513(T→A),1029(T→A),1172(T→C)。
【圖文】：

第2章實驗2.3.1變形鏈球菌耐氟菌株的誘導(dǎo)UA159見圖1，UA159FR的鏡下形態(tài)見圖2:圖l:uA159FR在BHI培養(yǎng)基上的形態(tài)圖2:uA159段在鏡下的形態(tài)(1oo倍油鏡)2.3.2變形鏈球菌耐氟菌株基因組的提取UA159基因組的提取見圖3:20側(cè)腸口1創(chuàng)口嘴.7加阮l5加腸圖3:以159FR基因組的提取。 1:D200oDNAMal火er;2、3:u^z59FR基因組 2.3.3dfP和 dnaKpCR產(chǎn)物:1.d印:根據(jù)GenBank發(fā)表的變形鏈球菌d印基因序列，設(shè)計引物。d印基因全長540bP。上游引物:夕一ATACCAACGCCTACATGGCA一3’下游引物:5’一GGACCATAGACAATAGAGGC一3’

態(tài)(1oo倍油鏡)2.3.2變形鏈球菌耐氟菌株基因組的提取UA159基因組的提取見圖3:20側(cè)腸口1創(chuàng)口嘴.7加阮l5加腸圖3:以159FR基因組的提取。 1:D200oDNAMal火er;2、3:u^z59FR基因組 2.3.3dfP和 dnaKpCR產(chǎn)物:1.d印:根據(jù)GenBank發(fā)表的變形鏈球菌d印基因序列，，設(shè)計引物。d印基因全長540bP。上游引物:夕一ATACCAACGCCTACATGGCA一3’下游引物:5’一GGACCATAGACAATAGAGGC一3’
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R781.1

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本文編號：2626476