發(fā)布時(shí)間：2020-04-13 21:40

【摘要】：齲病是人類(lèi)最常見(jiàn)的細(xì)菌感染性疾病之一。變形鏈球菌是人類(lèi)齲病的始發(fā)因素,通過(guò)對(duì)牙面的粘附、產(chǎn)酸及耐酸表現(xiàn)其致齲性,是目前公認(rèn)的最重要的致齲菌。氟化物是目前最有效的防齲致劑,因此得到在全世界范圍內(nèi)的廣泛應(yīng)用。然而為了提高并維持菌斑內(nèi)較高的氟化物水平,更好的預(yù)防和治療齲病,局部應(yīng)用氟化物的濃度和次數(shù)逐漸增加,將有可能導(dǎo)致耐氟菌株的選擇性生長(zhǎng)。耐氟菌株與親代菌株相比具有更強(qiáng)的耐氟性、產(chǎn)酸和耐酸能力,致齲能力也隨之增強(qiáng)。變形鏈球菌耐氟菌株耐酸能力的提高,是其致齲性提高的一個(gè)重要因素,對(duì)于耐酸相關(guān)基因的研究,一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱門(mén)。目前本課題組在前期的研究中已檢測(cè)出變形鏈球菌耐氟菌株中耐酸相關(guān)基因ffh、dgk、dltc等發(fā)生突變,突變的具體位置也已經(jīng)清楚,結(jié)果已登陸美國(guó)GenBank。本實(shí)驗(yàn)以變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因dfp和dnaK為目的基因。采用體外人工誘導(dǎo)法誘導(dǎo)變形鏈球菌耐氟菌株,根據(jù)GenBank發(fā)表的變形鏈球菌耐酸相關(guān)基因dfp和dnaK的序列,根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則,在保守區(qū)分別設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR,獲得目的基因片段,用pMD18-T載體進(jìn)行T/A連接,轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建重組質(zhì)粒,交由生化公司進(jìn)行測(cè)序鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因dfp沒(méi)有發(fā)生突變,而dnaK與GenBank報(bào)告序列不同,有3個(gè)堿基發(fā)生突變。突變發(fā)生的位點(diǎn)分別在513(T→A),1029(T→A),1172(T→C)。
【圖文】：

第2章實(shí)驗(yàn)2.3.1變形鏈球菌耐氟菌株的誘導(dǎo)UA159見(jiàn)圖1，UA159FR的鏡下形態(tài)見(jiàn)圖2:圖l:uA159FR在BHI培養(yǎng)基上的形態(tài)圖2:uA159段在鏡下的形態(tài)(1oo倍油鏡)2.3.2變形鏈球菌耐氟菌株基因組的提取UA159基因組的提取見(jiàn)圖3:20側(cè)腸口1創(chuàng)口嘴.7加阮l5加腸圖3:以159FR基因組的提取。 1:D200oDNAMal火er;2、3:u^z59FR基因組 2.3.3dfP和 dnaKpCR產(chǎn)物:1.d印:根據(jù)GenBank發(fā)表的變形鏈球菌d印基因序列，設(shè)計(jì)引物。d印基因全長(zhǎng)540bP。上游引物:夕一ATACCAACGCCTACATGGCA一3’下游引物:5’一GGACCATAGACAATAGAGGC一3’

態(tài)(1oo倍油鏡)2.3.2變形鏈球菌耐氟菌株基因組的提取UA159基因組的提取見(jiàn)圖3:20側(cè)腸口1創(chuàng)口嘴.7加阮l5加腸圖3:以159FR基因組的提取。 1:D200oDNAMal火er;2、3:u^z59FR基因組 2.3.3dfP和 dnaKpCR產(chǎn)物:1.d印:根據(jù)GenBank發(fā)表的變形鏈球菌d印基因序列，，設(shè)計(jì)引物。d印基因全長(zhǎng)540bP。上游引物:夕一ATACCAACGCCTACATGGCA一3’下游引物:5’一GGACCATAGACAATAGAGGC一3’
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R781.1

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本文編號(hào)：2626476