【摘要】： 牙髓干細(xì)胞的研究是目前牙髓生物學(xué)領(lǐng)域一個(gè)嶄新的課題，它對(duì)認(rèn)識(shí)牙髓損傷修復(fù)機(jī)理、探索新的保存牙髓治療技術(shù)具有重要的意義。本研究著眼于小鼠牙髓干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定的實(shí)驗(yàn)研究，為研究牙髓干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)分化創(chuàng)建可靠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀２⒊醪教接慛otch信號(hào)在牙髓干細(xì)胞中的生物學(xué)功能。 我們成功地從小鼠牙髓組織中培養(yǎng)獲得牙髓干細(xì)胞，進(jìn)一步分析結(jié)果顯示：1)牙髓干細(xì)胞有增殖快的特點(diǎn)，細(xì)胞呈集落狀生長(zhǎng)，集落形成率為1.6-2.5／10~4個(gè)細(xì)胞。2)H．E．染色，，見細(xì)胞有體小、核大的特點(diǎn)，有較多的雙核細(xì)胞，細(xì)胞間的界限不清。3)堿性磷酸酶染色陽性。4)細(xì)胞表型組化鑒定Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、Osteonectin、Osteopontin、FGF-2、BSP染色陽性，而DSPP染色陰性。5)端粒酶 第口旱巨大卿饞士學(xué)正枯文 活性分析結(jié)果，牙髓干細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞有著本質(zhì)上的區(qū)別，為非永生 性細(xì)胞，且端粒酶活性隨著體外培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而降低。6）電鏡觀察牙 髓干細(xì)胞間存在細(xì)胞連接，在一定程度上說明細(xì)胞間有著較復(fù)雜的信 號(hào)通訊方式，并影響著牙髓干細(xì)胞的增殖與分化。 本課題對(duì)獲得的小鼠牙髓干細(xì)胞進(jìn)行了體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)。用 BMP》TGF－e、FGF等細(xì)胞因子對(duì)牙髓干細(xì)胞體外誘導(dǎo)8天DSPP In－RNA的表達(dá)，用 RT－PCR分析，結(jié)果表明有 DSPP InRNA的表達(dá)， 提示成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化成熟是牙髓干細(xì)胞和前體細(xì)胞增生并沿著 一定方向分階段分化的結(jié)果。DSPP是終末分化的成牙本質(zhì)細(xì)胞的特 征蛋白，說明牙髓干細(xì)胞可在BMPZ、TGF－p、FGF細(xì)胞因子誘導(dǎo)作 用下，有向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞分化的趨勢(shì)。同時(shí)觀察到細(xì)胞間信號(hào)NOtCh 在牙髓干細(xì)胞中有表達(dá)，為研究N。tCh信號(hào)對(duì)牙髓干細(xì)胞的增殖的影 響奠定基礎(chǔ)。 為了進(jìn)一步研究NOtCh信號(hào)途徑在牙髓干細(xì)胞分化過程中的作 用，我們擬利用N。tch途徑關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子RBP－J條件性基因剔除小鼠， 分析NmCh信號(hào)途徑阻斷后牙髓干細(xì)胞分化的變化。因此，我們構(gòu)建 了表達(dá)Cre基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，獲得表達(dá)有Cre的病毒上清，并 嘗試著感染N。t。h－RBP－J條件敲除小鼠的牙髓干細(xì)胞，結(jié)果顯示牙髓 干細(xì)胞的N。tCh信號(hào)途徑阻斷后，細(xì)胞的增殖受到一定程度的抑制， 提示N扯Ch信號(hào)途徑可能參與了牙髓干細(xì)胞的分化。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R781.3

【引證文獻(xiàn)】

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1 馬蓉;王艷梅;莊友梅;木合塔爾·霍加;;兔牙髓細(xì)胞的體外增殖及鑒定[J];中國組織工程研究;2012年49期

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1 賀慧霞;牙髓干細(xì)胞分離鑒定及其制備組織工程化牙本質(zhì)牙髓復(fù)合體的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 張紅梅;微環(huán)境對(duì)牙髓干細(xì)胞成牙能力的影響及MAPK信號(hào)分子機(jī)制調(diào)控的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2626064