【摘要】：研究目的:本課題首先在體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細(xì)胞(human gingival fibroblasts,HGFs)的基礎(chǔ)上,用real-time PCR法檢測(cè)脂聯(lián)素(Adiponectin,APN)對(duì)牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下HGFs分泌白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)、重組人血紅素加氧酶-1(HMOX-1)、環(huán)氧酶-2(COX-2)的影響,初步揭示脂聯(lián)素及牙齦成纖維細(xì)胞在牙周局部炎癥發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用,為進(jìn)一步探討牙周炎的致病機(jī)理和輔助藥物治療提供理論依據(jù)。研究方法:選取自2017年08月至2017年10月因拔除埋伏第三磨牙阻生齒在天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院頜面外科就診的患者(年齡20-26歲,平均年齡24歲),排除患有全身系統(tǒng)性疾病如糖尿病、妊娠,吸煙,獲得患者知情同意后,在術(shù)中收集色形質(zhì)健康、無明顯炎癥的牙齦組織。(1)運(yùn)用組織塊原代培養(yǎng)法從體外培養(yǎng)健康的人牙齦成纖維細(xì)胞,顯微鏡下觀察其生長(zhǎng)狀況,經(jīng)傳代后獲得大量的細(xì)胞,取第3代細(xì)胞進(jìn)行免疫組化染色進(jìn)行來源鑒定,選取4-6代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(2)分別用APN、P.g LPS、APN+P.g LPS刺激HGFs達(dá)24h。細(xì)胞刺激的情況如下:1μg/ml APN,2μg/ml P.g LPS,2μg/ml P.g LPS+1μg/ml APN,空白對(duì)照(10%FBS培養(yǎng)基)。(3)上述方法刺激細(xì)胞后,運(yùn)用real-time PCR法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(6、8、24h)HGFs中IL-6、IL-10、HMOX-1、COX-2的mRNA表達(dá)水平。(4)采用IBM SPSS Statistics 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,做描述性分析;計(jì)數(shù)資料表示:均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差;單因素分析采用One-way ANOVA來分析,析因設(shè)計(jì)采用析因分析,當(dāng)p0.05時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:(1)運(yùn)用組織塊貼壁法從組織塊中成功培養(yǎng)出HGFs。在顯微鏡下仔細(xì)觀察顯示:原代培養(yǎng)約6-8天后有細(xì)胞從組織塊中爬出,傳代后細(xì)胞形態(tài)為趨于一致的長(zhǎng)梭形。免疫組化結(jié)果顯示:細(xì)胞抗角蛋白染色呈現(xiàn)陰性,抗波形絲蛋白染色呈現(xiàn)陽性,證實(shí)我們培養(yǎng)的細(xì)胞為來源于中胚層的人牙齦成纖維細(xì)胞,且不混雜上皮源細(xì)胞。(2)與空白對(duì)照組相比,P.g LPS明顯促進(jìn)HGFs分泌炎性介質(zhì)IL-6與COX-2,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),明顯抑制HGFs分泌抗炎介質(zhì)IL-10與HMOX-1,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),P.g LPS可以明顯刺激HGFs的炎癥反應(yīng)。(3)與空白對(duì)照組相比,APN明顯抑制HGFs分泌炎性介質(zhì)IL-6與COX-2,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),促進(jìn)HGFs分泌抗炎介質(zhì)IL-10與HMOX-1,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);(4)在各炎性介質(zhì)最佳刺激點(diǎn),APN明顯抑制P.g LPS對(duì)HGFs分泌IL-6和COX-2的促進(jìn)作用,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);APN明顯抑制P.g LPS對(duì)HGFs分泌抗炎因子IL-10的效應(yīng),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);APN對(duì)P.g LPS刺激后HGFs分泌抗炎因子HMOX-1具有一定影響,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。結(jié)論:(1)牙齦成纖維細(xì)胞受到P.g LPS刺激后能合成分泌多種細(xì)胞炎癥因子發(fā)揮免疫炎癥反應(yīng),同時(shí)P.g LPS可以作為牙周炎體外模型的高效誘導(dǎo)劑。(2)APN可抑制HGFs分泌炎性介質(zhì)IL-6與COX-2,促進(jìn)分泌抗炎介質(zhì)IL-10與HMOX-1,發(fā)揮抗炎作用。APN可抑制P.g LPS刺激HGFs分泌IL-6及COX-2,也抑制P.g LPS對(duì)HGFs分泌抗炎因子IL-10的效應(yīng),產(chǎn)生抗炎作用。(3)APN可通過調(diào)控促炎因子和抗炎因子在牙周炎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定抗炎作用。
【圖文】：

HGFs組織來源的鑒定（免疫組織化學(xué)SP法)

不同時(shí)間點(diǎn)2μg/mlP.gLPS刺激HGFs分泌炎性介質(zhì)（圖3A:IL-6,圖3B:COX-2,圖3C:IL-10,圖3D:HMOX-1）
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R781.42

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 陳立銳;徐超;;控制牙周炎對(duì)糖尿病合并牙周炎患者療效的影響[J];慢性病學(xué)雜志;2015年02期

2 王琨;許彥枝;朱f趂，

本文編號(hào)：2624269