【摘要】：目的:本研究收集人正常及炎癥牙髓組織,檢測TOLL樣受體2(toll-like receptor 2,TLR2)在正常牙髓組織中的表達(dá)情況,比較正常與炎癥牙髓組織的基本形態(tài)和TOLL樣受體2(TLR2)的表達(dá)及分布。隨后體外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞(Human dental pulp cells,h DPCs)和變形鏈球菌,用變形鏈球菌提取物刺激h DPCs,模擬炎癥條件下的牙髓組織,檢測變形鏈球菌提取物對h DPCs中TLR2表達(dá)的影響。探討TLR2在牙髓組織中的定位與表達(dá)及與牙髓天然免疫的關(guān)系。方法:1.取臨床拔除的牙體組織完整,無癥狀的第三磨牙獲取牙髓組織,采用RT-PCR和Western-blot的方法檢測TLR2基因及蛋白在正常人牙髓組織中的表達(dá)。2.分別收集正常和炎癥人牙髓組織標(biāo)本,通過HE染色法觀察牙髓組織形態(tài),免疫組織化學(xué)技術(shù)對組織中TLR2的表達(dá)進(jìn)行定位。3.超聲破碎法提取變形鏈球菌提取物,并作用于體外培養(yǎng)的h DPCs,免疫組化檢測變形鏈球菌提取物作用于h DPCs后TLR2的表達(dá)和分布情況,熒光定量PCR(q PCR)檢測TLR2 m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果:1.正常牙髓組織表達(dá)TLR2。RT-PCR結(jié)果顯示,瓊脂糖凝膠電泳所有樣本均顯示條帶,與預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物大小相一致,正常牙髓組織中均可表達(dá)TLR2 m RNA;Western blot結(jié)果顯示,所有牙髓組織標(biāo)本TLR2均表達(dá)陽性。2.HE染色結(jié)果顯示,在炎癥牙髓組織中,大量炎性細(xì)胞浸潤及血管充血擴(kuò)張,而正常健康的牙髓是疏松的結(jié)締組織。免疫組化結(jié)果顯示正常牙髓組織和炎癥牙髓組織TLR2均表達(dá)陽性。TLR2表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)及血管周圍組織,但炎癥牙髓組織較正常牙髓組織陽明顯增強(qiáng)。陰性對照組未見陽性表達(dá)。3.牙髓細(xì)胞傳至第3代,形態(tài)均一,呈長梭形纖維細(xì)胞。免疫組化檢測結(jié)果顯示波形絲蛋白和DSPP呈染色陽性著色,角蛋白呈染色陰性著色,提示細(xì)胞來源于間充質(zhì),并且具有成牙本質(zhì)細(xì)胞的特性。變形鏈球菌鏡下觀察成球狀單體連成長鏈狀。免疫組化結(jié)果顯示,10 ug/m L和100ug/m L變形鏈球菌提取物10 ug/m L和100ug/m L作用牙髓細(xì)胞0 h、24h、48h后牙髓細(xì)胞均有TLR2表達(dá),且h PDCs TLR2陽性細(xì)胞的表達(dá)率隨著變形鏈球菌提取物刺激的時(shí)間增加而增大,均明顯高于空白對照組(P0.05)。PCR結(jié)果顯示10 ug/m L和100ug/m L兩種濃度變形鏈球菌提取物作用于h DPCs24 h、48h后,TLR2 m RNA的表達(dá)量明顯增加,高于空白對照組(P0.05),并且隨刺激時(shí)間的延長表達(dá)量逐漸增加(P0.05)。結(jié)論:牙髓組織中表達(dá)TLR2,且在炎癥牙髓情況下,TLR2表達(dá)上調(diào);并隨著刺激時(shí)間的增加,TLR2表達(dá)增加。我們推測牙髓組織通過表達(dá)TLR2進(jìn)行天然免疫防御并且TLR2參與牙髓損傷修復(fù)。
【圖文】：

Toll 樣受體 2 在人牙髓組織中表達(dá)和意義的研究 碩士學(xué)位論文A: 炎癥牙髓組織在低倍鏡下組織學(xué)表現(xiàn)（×100）B: 炎癥牙髓組織在低倍鏡下組織學(xué)表現(xiàn)（×200）C: 圖 B 中局部放大組織學(xué)表現(xiàn)（×400）D: 正常牙髓組織在低倍鏡下組織學(xué)表現(xiàn)（×100）E: 正常牙髓組織在低倍鏡下組織學(xué)表現(xiàn)（×200）F: 圖 E 中局部放大組織學(xué)表現(xiàn)（×400）3.2 免疫組織化學(xué)染色觀察TLR2 抗體染色結(jié)果：用抗 TLR2 抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組免疫組織化學(xué)染色，鏡下觀察結(jié)果，，炎癥牙髓組織中，細(xì)胞胞漿及胞膜呈棕色陽性表達(dá)。正常牙髓組織中，呈淺黃色弱表達(dá)。陰性對照組未見陽性著色（圖 2-2）

無陽性反應(yīng)細(xì)胞為 0 分，淺黃色為 1 分，棕黃色為 2 分，棕褐色分[76]。根據(jù)上述兩項(xiàng)指標(biāo)想乘積分?jǐn)?shù)=（1）×（2）。積為 0 判斷為（為 1～2 判斷為（+），積為 3～4 判斷（++），積為 6～9 判斷為（+++3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 牙髓細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定牙髓組織接種至培養(yǎng)瓶后，約一周可見牙髓組織塊周圍長有長梭胞爬出，呈放射狀（圖 3-1A），約 2 周后細(xì)胞融合接近 70%（圖 3-1傳至第三代細(xì)胞形態(tài)均一，呈長梭形，平行排列或呈旋渦狀生長（圖 3細(xì)胞免疫組化結(jié)果顯示該細(xì)胞角蛋白染色結(jié)果呈陰性著色（圖 3-1 D）染色結(jié)果呈陽性著色（圖 3-1 E）；波形絲染色結(jié)果呈強(qiáng)陽性著色（圖
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R781.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 羅心靜;莫選榮;周玲玲;;TLR2/4在Hsp72調(diào)控類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞IL-10生成中的作用[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2013年03期

2 陳仁;陳小蘋;林秋雄;;幽門螺桿菌內(nèi)毒素分子對肝細(xì)胞Toll樣受體2表達(dá)的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2010年13期

本文編號：2623592