發(fā)布時(shí)間：2020-04-08 14:08

【摘要】： 本文通過觀察周期性雙軸力學(xué)刺激對腺樣囊性癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACC-M、腺樣囊性癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACC-2的E-cad和α-cat、β_cat、γ-cat表達(dá)以及ACC細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的粘附的影響，研究力學(xué)刺激在ACC-M、ACC-2細(xì)胞粘附過程中的作用，探討腺樣囊性癌的粘附機(jī)制；通過觀察周期性雙軸力學(xué)刺激對ACC-M、ACC-2體外侵襲力以及MMP-9表達(dá)的影響，研究力學(xué)刺激對ACC-M、ACC-2細(xì)胞體外侵襲過程的作用，探討腺樣囊性癌的侵襲機(jī)制；通過觀察周期性雙軸力學(xué)刺激對ACC-M、ACC-2增殖的影響，研究力學(xué)刺激在ACC-M、ACC-2細(xì)胞增殖過程中的作用，探討腺樣囊性癌的增殖機(jī)制。從而為進(jìn)一步探討腫瘤受到力學(xué)刺激后癌細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)機(jī)制奠定基礎(chǔ)，指導(dǎo)臨床工作。 實(shí)驗(yàn)采用成組設(shè)計(jì)方法，分別選取頻率為3次/min的1000、4000μ應(yīng)變對ACC-M、ACC-2細(xì)胞分別加載，每天定點(diǎn)加載1次，每組加載時(shí)間分別為每次1hr、3hrs和6hrs，共加載2次。第3d上午8點(diǎn)收獲細(xì)胞；同時(shí)每次力學(xué)加載均在相同培養(yǎng)小室中做靜態(tài)對照實(shí)驗(yàn)。以未受力學(xué)刺激的細(xì)胞為對照組，受力學(xué)刺激的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，并進(jìn)行比較。細(xì)胞在力學(xué)刺激后行MMP-9、E-cad和α-cat、β-cat、γ-cat和細(xì)胞核免疫熒光雙染色，用激光共聚焦顯微鏡和圖象分析軟件進(jìn)行定位觀察和定量分析。用MTT法測定ACC-M、ACC-2細(xì)胞和ECM的粘附率。用transwell小室行ACC-M、ACC-2細(xì)胞體外侵襲力測定，計(jì)數(shù)每個(gè)視野穿透matrigel的癌細(xì)胞數(shù)目，結(jié)果用x±s表示。用流式細(xì)胞儀檢測ACC-2、ACC-M增殖。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)對照組除ACC-2細(xì)胞E-cad表達(dá)低于ACC-M細(xì)胞外，ACC-2細(xì)胞α-cat、β-cat、γ-cat表達(dá)均高于ACC-M細(xì)胞。對照組MMP-9在ACC-M細(xì)胞表達(dá)明顯高于ACC-2細(xì)胞，提示MMP-9與ACC的侵襲有密切關(guān)系。對照組ACC-2-ECM粘附率高于ACC-M-ECM細(xì)胞。對照組ACC-M的增殖水平較ACC-2高。不同大小的力學(xué)刺激及作用時(shí)間對ACC細(xì)胞和ECM的粘附率、增殖活性、侵襲能力、E-cad和α-cat、β-cat、γ-cat、MMP-9表達(dá)的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且這種影響還具有隨時(shí)間延續(xù)而變化的特性。綜上所述，ACC-M、ACC-2細(xì)胞在力學(xué)刺激后出現(xiàn)E-cad和cat復(fù)合體表達(dá)改變，同時(shí)還改變其和ECM的粘附率，，顯示力學(xué)刺激后細(xì)胞粘附發(fā)生變化，在腫瘤轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮重要的作用。ACC-M、ACC-2細(xì)胞在力學(xué)刺激后出現(xiàn)侵襲能力的改變，同時(shí)還可改變其MMP-9表達(dá)，顯示力學(xué)刺激可以調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移，我們認(rèn)為有MMP-9之外的蛋白在其中起作用。發(fā)現(xiàn)力學(xué)刺激對細(xì)胞增殖有影響并與力學(xué)刺激大小和作用時(shí)間相關(guān)，對腫瘤細(xì)胞施以力學(xué)刺激，分析其對腫瘤細(xì)胞生長行為的影響，對認(rèn)識腫瘤增殖的調(diào)控有一定意義。
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R739.8

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本文編號：2619442