發(fā)布時間：2020-04-04 22:34

【摘要】： 目的： Gronthos S等發(fā)現(xiàn)牙髓組織中存在干細(xì)胞(dental pulp stem cells, DPSCs)。該細(xì)胞具有強(qiáng)增殖性、多向分化的潛能,在體外誘導(dǎo)可向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞分化。同時,將DPSCs植入免疫缺陷鼠體內(nèi),發(fā)現(xiàn)有牙本質(zhì)樣基質(zhì)形成；最近Sonoyama等研究發(fā)現(xiàn)在根尖乳頭組織中存在干細(xì)胞,命名為根尖乳頭干細(xì)胞(Stem cell from the apical papilla, SCAP),并證明這類細(xì)胞是與牙髓干細(xì)胞(dental pulp stem cells, DPSCs)不同類型的細(xì)胞。本實驗?zāi)康氖求w外培養(yǎng)人根尖乳頭細(xì)胞,經(jīng)地塞米松礦化誘導(dǎo),誘導(dǎo)礦化結(jié)節(jié)的形成及DSP和其他相關(guān)蛋白的表達(dá),同時將腫瘤壞死因子α(TNF-α)對其進(jìn)行干預(yù),觀察其對礦化過程及牙本質(zhì)樣細(xì)胞形成的影響,探討炎癥條件下根尖乳頭細(xì)胞用于牙本質(zhì)再生的可行性。同時與同一牙的牙髓細(xì)胞進(jìn)行比較研究。 方法： 取18歲以下根尖未發(fā)育完成的健康阻生第三磨牙,用I型膠原酶和Dispase消化法進(jìn)行根尖乳頭細(xì)胞和牙髓細(xì)胞的培養(yǎng),細(xì)胞達(dá)到匯合后進(jìn)行傳代,取第3-5代細(xì)胞用于實驗。 1.取第3代細(xì)胞,將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞以1×104個／mL的細(xì)胞懸液,分別接種于預(yù)先放置有細(xì)胞爬片的6孔板中,用免疫熒光方法鑒定細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物STRO-1的表達(dá)。 2.將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞分別以1×104個／mL接種于96孔板中,孵育4d后,采用MTT法檢測細(xì)胞的增值狀況。 3.將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞分別以1×103個／mL接種于24孔板中,細(xì)胞大部分伸展貼壁后,加入礦化誘導(dǎo)液,孵育28d后,茜素紅S染色法檢測礦化結(jié)節(jié)形成情況,免疫組化法檢測牙本質(zhì)特異性蛋白DSP、礦化相關(guān)蛋白BSP表達(dá)情況。 4.將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞分別以1×104個／mL接種于96孔板中,24h后將含有不同濃度TNF-α(5、10、50 ng／mL)的培養(yǎng)液加入,孵育4d后,MTT法檢測其對細(xì)胞增殖活性的影響。 5.將根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞分別以1×103個／mL接種于24孔板中,細(xì)胞大部分伸展貼壁后,加入含有TNF-α的礦化誘導(dǎo)液,孵育28d后,茜素紅S染色法檢測礦化結(jié)節(jié)形成情況,免疫組化法檢測牙本質(zhì)特異性蛋白DSP、礦化相關(guān)蛋白BSP表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.原代培養(yǎng)的根尖乳頭細(xì)胞呈梭形、多角形或紡錘形,形似成纖維細(xì)胞。牙髓細(xì)胞也似成纖維細(xì)胞,形狀與根尖乳頭細(xì)胞相似。免疫熒光技術(shù)表明,部分細(xì)胞STRO-1染色陽性。 2. MTT法結(jié)果表明,APCS較之DPCS具有更強(qiáng)的增值活性(P0.05)。 3.礦化液體外誘導(dǎo),根尖乳頭細(xì)胞和牙髓細(xì)胞疊層生長,形成肉眼可見的結(jié)節(jié)；茜素紅S染色,有橘紅色礦化結(jié)節(jié)形成；免疫組織化學(xué)染色技術(shù)顯示,細(xì)胞誘導(dǎo)28d后,牙本質(zhì)特異性蛋白DSP、礦化相關(guān)蛋白BSP陽性表達(dá)。 4.在10ng／mL和50ng／mL兩個濃度時,TNF-α對根尖乳頭細(xì)胞、牙髓細(xì)胞兩種細(xì)胞的增值均具有促進(jìn)作用(P0.05)。 5.用含有TNF-α的礦化液誘導(dǎo),根尖乳頭細(xì)胞和牙髓細(xì)胞在較早的時間便有肉眼可見的結(jié)節(jié)形成。茜素紅S染色顯示,有橘紅色礦化結(jié)節(jié)形成；免疫組織化學(xué)染色技術(shù)顯示,細(xì)胞在炎性因子的誘導(dǎo)28d后,DSP、BSP陽性表達(dá)。 結(jié)論： 體外培養(yǎng)的根尖乳頭細(xì)胞形似成纖維細(xì)胞,STRO-1表達(dá)陽性；人根尖乳頭較牙髓細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖活性,在炎性環(huán)境下也具有較強(qiáng)的增殖活性；根尖干乳頭細(xì)胞在礦化液的誘導(dǎo)下向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞分化；在炎性環(huán)境中,根尖乳干頭細(xì)胞在礦化液的誘導(dǎo)下仍可向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞分化。這一發(fā)現(xiàn)可能有利于根尖未發(fā)育完成的年輕恒牙發(fā)生牙髓壞死以及由此引起的根尖周炎經(jīng)適當(dāng)?shù)闹委熀笱栏睦^續(xù)發(fā)育。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R781

【參考文獻(xiàn)】

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1 李俊;李政權(quán);高原;;從循證醫(yī)學(xué)角度分析國內(nèi)直接蓋髓術(shù)保存活髓的療效[J];廣西醫(yī)學(xué);2009年07期

2 于美嬌;楊丕山;葛少華;;苯妥英鈉對人牙周膜成纖維細(xì)胞生物學(xué)活性影響的實驗研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

3 吳莉萍;韋曦;凌均h，

本文編號：2614150