【摘要】：目的:上頜橫向發(fā)育不足是臨床中常見(jiàn)的一種錯(cuò)鄈畸形,常使用上頜擴(kuò)弓進(jìn)行治療,其中成人擴(kuò)弓效果欠佳、易復(fù)發(fā),受到了越來(lái)越多的關(guān)注。上頜擴(kuò)弓的目的是打開(kāi)腭中縫即縫的牽張成骨,其成骨機(jī)制尚不清楚。核因子KB(nuclear factor-κB,NF-κB)是近年來(lái)研究比較熱門(mén)的與成骨相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,而吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)是NF-κB信號(hào)通路的特異性抑制劑。1、研究擴(kuò)弓簧作用后大鼠前腭縫的組織學(xué)變化。2、研究特異性核因子KB抑制劑PDTC注射后對(duì)大鼠擴(kuò)弓作用的影響。方法:1、建立成年大鼠單純擴(kuò)弓及核因子KB抑制后的擴(kuò)弓模型:45只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為3組,分別為空白組15只、擴(kuò)弓組15只、PDTC組15只。擴(kuò)弓組及PDTC組大鼠兩門(mén)牙間裝擴(kuò)弓簧,PDTC組在裝擴(kuò)弓簧前30分鐘腹腔注射核因子KB抑制劑PDTC 100mg/kg,以后每天同一時(shí)間腹腔注射同樣劑量PDTC,其余組腹腔注射等劑量的生理鹽水。各組再隨機(jī)分為3小組,每組5只,分別于擴(kuò)弓1、4、7天后處死。完整切取大鼠上頜骨放于10%福爾馬林中固定。2、Micro-CT掃描:將大鼠的上頜骨標(biāo)本在10%的福爾馬林中固定24小時(shí)之后,使用高分辨率Micro-CT掃描大鼠前腭縫,并測(cè)量?jī)蓚?cè)腭骨前緣間的距離作為大鼠前腭縫的寬度。3、HE、Masson及免疫組織化學(xué)染色:將掃描后的大鼠上頜骨標(biāo)本進(jìn)行HE染色觀(guān)察前腭縫的組織形態(tài);Masson染色觀(guān)察膠原纖維及新生骨;免疫組織化學(xué)分析p65及骨誘導(dǎo)因子BMP-2、成骨活性標(biāo)志物OCN的表達(dá)。結(jié)果:1、建模結(jié)果建模過(guò)程中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無(wú)脫失,建模結(jié)束后擴(kuò)弓組及PDTC組大鼠的門(mén)牙間出現(xiàn)間隙,且隨擴(kuò)弓時(shí)間延長(zhǎng)門(mén)牙間間隙逐漸增寬,說(shuō)明建模成功。建模中各組大鼠的體重觀(guān)察:空白組大鼠體重穩(wěn)步增加,擴(kuò)弓組及PDTC組大鼠在裝擴(kuò)弓簧1天及2天后體重下降,而后體重穩(wěn)步增長(zhǎng)。對(duì)初始及擴(kuò)弓1天后體重做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),初始時(shí)各組體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),擴(kuò)弓1天后PDTC組及擴(kuò)弓組大鼠體重均低于空白組(P0.05),而擴(kuò)弓組與PDTC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)PDTC組大鼠腹腔注射PDTC后異常興奮,行為異常。2、Micro-CT掃描結(jié)果三維掃描后觀(guān)察到空白組大鼠兩側(cè)腭骨沒(méi)有融合,大鼠的前腭縫并不是一條直線(xiàn)而是有一些小的突起;擴(kuò)弓組及PDTC組大鼠的前腭縫從第4天開(kāi)始可以觀(guān)察到有指狀新骨形成,且第7天時(shí)新骨形成增多;空白組隨時(shí)間延長(zhǎng)前腭縫寬度幾乎沒(méi)有變化,擴(kuò)弓組及PDTC組隨擴(kuò)弓時(shí)間延長(zhǎng)縫寬度增加,擴(kuò)弓1天后PDTC組及擴(kuò)弓組前腭縫寬度大于空白組,但二者間無(wú)差異,擴(kuò)弓4、7天后PDTC組縫寬大于擴(kuò)弓組(P0.05)。3、HE、Masson及免疫組織化學(xué)染色結(jié)果HE染色可見(jiàn)空白組大鼠組織形態(tài)無(wú)變化,前腭縫由成骨層、纖維包囊層、中間層、纖維包囊層、成骨層構(gòu)成。擴(kuò)弓4、7天后出現(xiàn)底位于上頜骨、尖端朝向縫的新生骨,新生骨周?chē)晒羌?xì)胞聚集,有新生血管形成。Masson染色中可以看到擴(kuò)弓組及PDTC組纖維幾乎全為藍(lán)染的膠原纖維,且膠原纖維的方向與新生骨的方向一致,大部分為水平向無(wú)交叉生成,少數(shù)新生骨與膠原纖維為斜向發(fā)生。免疫組化染色中可以發(fā)現(xiàn),擴(kuò)弓組在各時(shí)間點(diǎn)新生骨邊緣p65的平均光密度值高于PDTC組(P0.05);空白組BMP-2及OCN的平均光密度值無(wú)變化(P0.05);在各時(shí)間點(diǎn)BMP-2的平均光密度值PDTC組大于擴(kuò)弓組大于空白組(P0.05),組內(nèi)比較擴(kuò)弓組4天BMP-2的平均光密度值大于1天,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),7天BMP-2的平均光密度值大于4天(P0.05);OCN的平均光密度值,1天時(shí)擴(kuò)弓組與空白組無(wú)差異(P0.05),PDTC組大于二者,組內(nèi)比較隨作用時(shí)間延長(zhǎng)擴(kuò)弓組及PDTC組OCN的平均光密度值均增大(P0.05)。結(jié)論:1、機(jī)械張力作用后成骨細(xì)胞增殖、活化;骨誘導(dǎo)因子BMP-2表達(dá)增多,間充質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞功能轉(zhuǎn)化;膠原纖維增多,為骨無(wú)機(jī)物沉積提供支架;新生血管的大量新生,進(jìn)一步促進(jìn)了縫牽張成骨。2、上頜骨縫成骨的方向與擴(kuò)弓力的方向一致,傾斜的擴(kuò)張力可導(dǎo)致傾斜的骨生成,可能造成上頜骨偏斜、不對(duì)稱(chēng)。3、大鼠腹腔注射PDTC后可抑制前腭縫成骨細(xì)胞中NF-κB p65亞基的表達(dá),不影響大鼠生長(zhǎng)發(fā)育但存在神經(jīng)興奮等其他副作用。4、NF-κB參與大鼠擴(kuò)張力后的前腭縫骨改建;抑制NF-κB可使成骨細(xì)胞活性增強(qiáng)、成骨相關(guān)因子BMP-2、OCN表達(dá)增多,促進(jìn)前腭縫的擴(kuò)寬及增強(qiáng)牽張成骨作用。
【圖文】：

圖 1-1：三組動(dòng)物建模期間體重變化趨勢(shì)圖-CT 掃描結(jié)果大鼠上頜骨標(biāo)本均成功的進(jìn)行了 Micro-CT 掃描，結(jié)果如下 2-1：Micro-CT 掃描大鼠上頜骨，觀(guān)察前腭縫寬度的變化及牽形成情況，發(fā)現(xiàn)：未做處理時(shí)，大鼠的前腭縫沒(méi)有完全的閉的并非完全為直線(xiàn)的縫隙，，縫邊緣不平坦而是有一些小骨突白組、擴(kuò)弓組、PDTC 組在宏觀(guān)結(jié)構(gòu)上沒(méi)有明顯的不同；擴(kuò)弓弓組及 PDTC 組前腭縫區(qū)有指狀突起形成，突起由腭骨邊緣腭縫變寬；擴(kuò)弓 7 天后，突入前腭縫中的突起長(zhǎng)度增長(zhǎng)、數(shù)進(jìn)一步增寬。 2-2：Micro-CT 掃描后可以看到，個(gè)別樣本中有明顯的牙齒像中兩門(mén)牙之間的縫寬度較其它部位增加更明顯。同時(shí)，個(gè)突起的排列并非水平方向，而為斜行排列。

擴(kuò)弓組及 PDTC 組不同時(shí)間點(diǎn)的縫寬度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，擴(kuò)弓 7 天后的縫寬度大于擴(kuò)弓 4 天，擴(kuò)弓 4 天后的縫寬度大于擴(kuò)弓 1 天。（表 2-1）表 2-1 三組前腭縫寬度比較（n=5）分組前腭縫寬度（μm）F 值 P 值第 1 天 第 4 天 第 7 天空白組 114.78±19.17 115.85±15.00 119.78±11.26 0.144 0.867擴(kuò)弓組 253.94±25.25a708.07±57.40a*1005.27±80.83a*△205.211 <0.001PDTC 組 266.18±16.76a916.41±74.30ab*1227.00±186.51ab*△88.847 <0.001F 值 82.516 286.204 124.21P 值 <0.001 <0.001 <0.001注：a與空白組比P<0.05,b與擴(kuò)弓組比P<0.05;*與第1天比 P<0.05,△ 與第4天比P<0.051d 4d 7d
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R783.5

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本文編號(hào)：2613672