發(fā)布時(shí)間：2020-03-30 07:13

【摘要】：齲病是最常見的人類口腔疾病,變形鏈球菌是引起人類齲病最主要的致病菌。變形鏈球菌致齲是一個(gè)多因素綜合作用的結(jié)果,既包括已知的各種致齲因子,也可能還有目前仍不了解的其它因子或各種因子間的相互作用。因此,為了揭示變形鏈球菌致齲的機(jī)理,從細(xì)菌的整體水平研究變形鏈球菌是十分必要的,而SELEX技術(shù)為這一研究設(shè)想提供了實(shí)用工具。 指數(shù)式富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SELEX)是近年發(fā)展起來(lái)的研究核酸結(jié)構(gòu)、功能及進(jìn)化的一種組合化學(xué)技術(shù),在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷和疾病治療中都顯現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用前景。尤其是以完整細(xì)胞為靶子的消減SELEX技術(shù)的建立,使得研究不同細(xì)胞靶子上存在的未知差異靶分子成為可能。 本研究的目的是利用以完整細(xì)胞為靶子的消減SELEX技術(shù)篩選不同致齲性變形鏈球菌臨床分離株差異ssDNA配基。 為了達(dá)到研究目的,我們首先利用細(xì)菌形態(tài)學(xué)、生化反應(yīng)、自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)及分子生物學(xué)方法從11名受試者口腔牙菌斑中鑒定獲得了性質(zhì)確實(shí)可靠的5株變形鏈球菌臨床分離株,其中3株來(lái)源于高齲患者,2株來(lái)源于無(wú)齲健康人；然后通過經(jīng)典的體外致齲實(shí)驗(yàn),即唾液包被羥基磷灰石粘附實(shí)驗(yàn)、合成胞外多糖實(shí)驗(yàn)、產(chǎn)酸及耐酸實(shí)驗(yàn)對(duì)篩選獲得的變形鏈球菌臨床分離株的致齲特性進(jìn)行檢測(cè)。綜合考慮各實(shí)驗(yàn)結(jié)果并輔以統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后,確定了臨床分離株5為高致齲性變形鏈球菌,臨床分離株4為低致齲性變形鏈球菌；采用全長(zhǎng)為88nt、隨機(jī)區(qū)由45個(gè)堿基構(gòu)成的ssDNA文庫(kù),以變形鏈球菌臨床分離株5為篩選靶子,變形鏈球菌臨床分離株4為消減靶子,進(jìn)行了9輪以完整細(xì)胞為靶子的消減SELEX篩選,獲得了不同致齲性變形鏈球菌臨床分離株差異ssDNA配基H19。H19與篩選靶子-變形鏈球菌臨床分離株5的親和力較高,解離常數(shù)為69.45±38.53nM。 本課題研究中篩選獲得的不同致齲性變形鏈球菌臨床分離株差異ssDNA配基有可能用于臨床齲病易感性的預(yù)測(cè),并且有可能發(fā)展成為抑制或阻斷變形鏈球菌致齲的防齲制劑,為齲病防治提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R781.1

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 胡丹陽(yáng);高齲學(xué)齡前兒童變形鏈球菌水平傳播的研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

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本文編號(hào)：2607230