發(fā)布時(shí)間：2020-03-28 03:57

【摘要】：第一部分：腫瘤細(xì)胞exosome的分離和鑒定 目的：檢測(cè)舌鱗癌細(xì)胞系Tca-8113在體外培養(yǎng)時(shí)分泌exosome的能力，觀察Tca-8113細(xì)胞形成exosome的過程，從培養(yǎng)上清液中分離exosome并測(cè)量其大小、觀察其形態(tài)、分析其組成成分等。 方法：培養(yǎng)Tca-8113細(xì)胞，用Millipore濃縮離心管分離純化培養(yǎng)上清液中的exosome，透射電鏡觀察Tca-8113細(xì)胞多泡體(multivesicular body，MVB)和exosome的超微結(jié)構(gòu)、形成過程；用凍溶法制備腫瘤凍溶抗原(frozen tumor antigen，F(xiàn)TA)；用ELISA法測(cè)定exosome中MHC Ⅰ類分子的含量；用Western blotting定性分析exosome和FTA中的MHC Ⅰ和Hsc70。 結(jié)果：經(jīng)透射電鏡觀察，Tca-8113細(xì)胞內(nèi)有大量MVB。出現(xiàn)在MVB腔內(nèi)的小囊泡由MVB的膜向內(nèi)出芽形成，MVB膜胞漿面成了小囊泡的內(nèi)面，，小囊泡內(nèi)包裹的主要是細(xì)胞漿。MVB膜與細(xì)胞質(zhì)膜融合后，小囊泡被釋放到細(xì)胞外的間質(zhì)中。從Tca-8113細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離得到的exosome，形狀為球形、橢球形或啞鈴形，直徑為30～90nm。用Western blotting分析exosome和FTA，其MHC Ⅰ和Hsc70均為陽性；ELISA法一抗用鼠抗人MHC Ⅰ(HLA-A、HLA-B、HLA-C)單抗測(cè)得Tca-8113細(xì)胞每ml培養(yǎng)上清液中含(7.35±1.47)×10~9個(gè)MHC Ⅰ類分子，相當(dāng)于每個(gè)Tca-8113細(xì)胞每天向胞外分泌(0.92±0.18)×10~4個(gè)exosome形式的MHC Ⅰ類分子。 結(jié)論：腫瘤細(xì)胞Tca-8113在體外培養(yǎng)時(shí)可以分泌exosome；exosome中
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R739.8

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本文編號(hào)：2603888