【摘要】：目的：觀察富血小板纖維蛋白對人牙周膜細胞體外增殖及分化的影響。 方法： 1.人牙周組織的獲取 組織來自于臨床因正畸治療而拔除的健康、無齲壞的雙尖牙,患者年齡為13～18歲，無性別差異。 2.人牙周膜細胞的培養(yǎng) 將牙根中1/3的牙周膜輕輕刮除，并剪成1×1mm3大小，，采用組織塊法進行細胞培養(yǎng)。本實驗取第3～6代牙周膜細胞用于后續(xù)實驗。 3.人牙周膜細胞的鑒定 （1）倒置相差顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察。 （2）波形絲蛋白、角蛋白免疫組化。 4.觀察不同濃度PRF滲出液（4%、20%、100%）對人牙周膜細胞增殖的影響 （1）CCK-8檢測細胞增殖情況。 （2）流式細胞儀測定細胞周期。 5.觀察不同濃度PRF滲出液（4%、20%、100%）對人牙周膜細胞分化的影響 （1）堿性磷酸酶活性的檢測。 （2）牙周膜細胞進行礦化誘導(dǎo)后，進行茜素紅染色，并將與鈣結(jié)合的茜素紅溶解到溶液中，進行半定量分析。 （3）Western Blot對細胞Runx2蛋白表達情況進行分析。 結(jié)果： （1）原代所培養(yǎng)的人牙周膜細胞呈長梭型，生長速度快，并以漩渦狀分布。免疫組化染色中角蛋白染色陰性,波形絲蛋白染色陽性。 （2）不同濃度的PRF滲出液（4%、20%、100%）對人牙周膜細胞增殖和分化能力的影響 ①人牙周膜細胞增殖情況: 在CCK-8實驗中，20%、100%PRF組在所設(shè)時間點均可顯著地促進牙周膜細胞增殖(P＜0.05)。4%PRF組在day1能顯著地促進細胞增殖(P＜0.05)，然而在day2和day3，其促進效果不顯著（P＞0.05）。 在細胞周期測定中，各實驗組的細胞增殖指數(shù)（PI）均明顯較對照組高(P＜0.05)。 ②細胞堿性磷酸酶活性測定: 與對照組相比，100%PRF組展現(xiàn)出最高水平的堿性磷酸酶活性，并且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),然而4%PRF組的堿性磷酸酶活性在day7和day14增加不顯著（P＞0.05）。 ③茜素紅染色以及鈣化顆粒的半定量分析： 成骨誘導(dǎo)2W后，在倒置顯微鏡下能觀察到礦化顆粒的形成，并且MM+100%PRF組所形成的顆粒數(shù)量最多，然而在對照組很難發(fā)現(xiàn)礦化顆粒。此外，礦化顆粒經(jīng)CPC溶解后，吸光度（λ=570nm）值表明100%PRF組以及礦化組+100%PRF組細胞外鈣沉積分別較對照組以及礦化組的要高。 （4） Runx2蛋白含量的測定 相對于對照組以及礦化組，100%PRF組以及MM+100%PRF組在不同時間點Runx2蛋白表達均上調(diào)。 結(jié)論： 1.PRF以劑量依耐性的方式促進人牙周膜細胞體外增殖。 2.PRF能促進牙周膜細胞在體外的分化。
【圖文】：

表 3.1 波長 450 nm 下所測定的 OD 值（ ±s ,n=5）24h 48h 72h對照組 0.485±0.031 0.765±0.011 1.047±0.0104%PRF(E3) 0.524±0.007 0.798±0.012 1.088±0.05220%PRF(E2) 0.543±0.035 0.906±0.028 1.171±0.053100%PRF(E1) 0.604±0.015 1.086±0.045 1.373±0.024
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R781.42

【參考文獻】

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1 孫潔;張劍明;李彥秋;;富血小板纖維蛋白超微結(jié)構(gòu)的觀察與探討[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2010年01期

2 江龍;朱亞琴;;改良組織塊法體外培養(yǎng)人牙周膜細胞和牙髓細胞[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2008年04期

本文編號：2602574