【摘要】：目的體外建立白色假絲酵母菌(candida albicans C.a)感染人口腔黏膜上皮細(xì)胞(h OMECs)模型,探討人重組白介素17A(rh IL-17A)對(duì)h OMECs表達(dá)β-防御素(h BDs)、S100A8及LL-37的影響及其抑制C.a感染h OMECs的作用。方法1.觀(guān)察C.a感染h OMECs過(guò)程中rh IL-17A抑制C.a感染h OMECs的情況。進(jìn)一步采用100μg/L rh IL-17A處理C.a 24h后,激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察rh IL-17A對(duì)C.a生長(zhǎng)繁殖及形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。2.探索不同濃度的rh IL-17A對(duì)h OMECs表達(dá)h BDs的影響:選用1、10、100、1000μg/L的rh IL-17A分別刺激h OMECs 48h,采用ELISA和RT-PCR分別檢測(cè)h BD-1,2,3的蛋白及m RNA表達(dá)水平。3.將細(xì)胞隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組;單獨(dú)C.a處理組(模型組);單獨(dú)rh IL-17A處理組;rh IL-17A與C.a處理組(實(shí)驗(yàn)組)。用C.a感染h OMECs2h(感染復(fù)數(shù)MOI=0.1),建立C.a感染h OMECs模型,再用100μg/L的rh IL-17A處理h OMECs或感染C.a的h OMECs模型24 h,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,稀釋后重新接種到沙氏培養(yǎng)基中,通過(guò)數(shù)菌落數(shù)計(jì)算C.a黏附率。ELISA方法檢測(cè)上清液中h BD-1,2,3水平,RT-PCR檢測(cè)貼壁細(xì)胞的h BD-1,2,3、S100A8、LL-37的m RNA表達(dá)水平。結(jié)果1.C.a感染h OMECs過(guò)程中,光鏡下可見(jiàn)C.a形成菌絲并感染h OMECs引起細(xì)胞死亡,而在rh IL-17A的作用下,實(shí)驗(yàn)組中C.a無(wú)菌絲形成,無(wú)C.a感染h OMECs;激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察到在rh IL-17A作用下的C.a生長(zhǎng)繁殖停止,無(wú)菌絲及菌落形成。2.與模型組比較,在rh IL-17A的作用下,C.a對(duì)h OMECs的黏附率降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.RT-PCR結(jié)果顯示,10、100、1000μg/L的rh IL-17A均能誘導(dǎo)h OMECs表達(dá)h BD-2,分別與空白對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,(P0.05),各濃度組兩兩比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。ELISA結(jié)果顯示,1、10、100、1000μg/L的rh IL-17A均能誘導(dǎo)h OMECs表達(dá)h BD-2,分別與空白對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,(P0.001),各濃度組兩兩比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001),100μg/L組h BD-2 m RNA水平及蛋白水平升高最為顯著。4.h OMECs中的h BD-2水平在C.a及100μg/L的rh IL-17A的誘導(dǎo)下呈表達(dá)上調(diào),(P0.05),rh IL-17A誘導(dǎo)能力高于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P0.05);在C.a的激惹下,h BD-2表達(dá)水平均高于模型組和rh IL-17A組,(P0.05)。S100A8 m RNA、LL-37 m RNA水平在C.a的誘導(dǎo)下表達(dá)下降,(P0.05),在rh IL-17A的刺激下呈表達(dá)上調(diào)(P0.05),S100A8 m RNA表達(dá)趨勢(shì)與LL-37 m RNA一致。結(jié)論rh IL-17A可能通過(guò)抑制白色假絲酵母菌的生長(zhǎng)繁殖及菌絲的生成,從而抑制白色假絲酵母菌感染口腔黏膜上皮細(xì)胞。另外rh IL-17A還可能通過(guò)誘導(dǎo)口腔黏膜上皮細(xì)胞分泌h BD-2、S100A8、LL-37,在口腔黏膜上皮細(xì)胞中共同發(fā)揮抗感染作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R781.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2490193