【摘要】：目的 VHL的表達缺失與多種人類惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),但在口腔鱗癌中的作用還不清楚。前期實驗顯示上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)與口腔鱗癌的侵襲及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。本研究旨在檢測VHL在口腔鱗癌中的表達,分析VHL和EMT的關(guān)系,并探索VHL調(diào)控口腔癌鱗癌EMT的機制。 方法 1.收集天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院口腔鱗癌手術(shù)標本80例作為實驗對象,并取13例癌旁組織作為對照,應(yīng)用免疫組化SP法檢測VHL、HIF-1α及EMT相關(guān)蛋白(β-catenin、Snail、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2/9表達,χ2檢驗或Fisher確切檢驗分析VHL、HIF-1α及EMT相關(guān)蛋白的表達與口腔鱗癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系。Spearman等級相關(guān)分析VHL與EMT相關(guān)蛋白的關(guān)系。應(yīng)用Kaplan-Meier法繪制患者生存曲線,Log-rank檢驗分析各指標與術(shù)后5年生存率的相關(guān)性,Cox回歸分析各種預(yù)后因素的獨立預(yù)后意義。 2.采用lipofectamine2000介導(dǎo)VHL基因表達質(zhì)粒pCDNA3-VHL轉(zhuǎn)染Tscca及Tca8113P160舌鱗癌細胞,Western blot檢測恢復(fù)VHL蛋白表達效果。觀察轉(zhuǎn)染后細胞形態(tài)學(xué)變化,MTT法測定細胞增值率變化；Transwell體外遷移實驗、劃痕實驗檢測細胞侵襲、遷移能力變化；Western blot、免疫熒光實驗檢測VHL及EMT相關(guān)蛋白表達。 結(jié)果 1.VHL在口腔鱗癌組織中的表達陽性率(31.3%)明顯低于癌旁組織(69.2%,P=0.013)。癌組織中VHL在高分化及非淋巴轉(zhuǎn)移組中的表達分別高于中低分化組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。β-catenin、N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9表達和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),HIF-1α表達和腫瘤T分期有關(guān)。VHL表達和β-catenin、Snail、E-cadherin、MMP-2、HIF-1α表達呈負相關(guān)。單因素生存分析結(jié)果顯示VHL陽性患者的5年生存率(56.0%)明顯高于陰性患者(23.6%,P=0.002)。 COX模型分析顯示VHL表達,腫瘤分化程度,有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是口腔鱗癌患者的獨立預(yù)后因素。 2.在VHL低表達的Tscca及Tca8113P160舌鱗癌細胞中轉(zhuǎn)染VHL基因表達質(zhì)粒pCDNA3-VHL,'恢復(fù)VHL的表達。pCDNA3-VHL組細胞形態(tài)學(xué)發(fā)生變化,表現(xiàn)出上皮細胞特征�；謴�(fù)VHL表達的細胞增殖率較對照組明顯受到抑制；通過Transwell小室碳酸酯膜的細胞數(shù)少于對照組,劃痕閉合減慢。細胞恢復(fù)VHL表達后β-catenin, snail, N-cadherin、MMP-2/9、HIF-1α、VEGF蛋白表達下調(diào),E-cadherin表達上調(diào)。免疫熒光及western blot檢測核漿分離蛋白證實VHL抑制β-catenin在細胞核中的表達。 結(jié)論 VHL蛋白在口腔鱗癌中呈低表達并和腫瘤分化、轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān),VHL的表達缺失與口腔鱗癌EMT過程相關(guān),并且可能通過調(diào)控EMT影響口腔鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后。在舌鱗癌細胞系中恢復(fù)VHL表達后細胞形態(tài)發(fā)生改變,增殖、遷移、侵襲能力減弱且EMT相關(guān)蛋白表達量改變。VHL可能通過β-catenin及下游分子調(diào)控口腔鱗癌的EMT過程。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

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3 陸虹e，

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