【摘要】：口腔鱗癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤。臨床上,淋巴道轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是影響口腔鱗癌患者預(yù)后的重要因素,而腫瘤局部高濃度的乳酸聚集是淋巴道或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要因素。單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)體4(Monocarboxylate transporter4, MCT4)是單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)體家族的一員,在腫瘤糖酵解中,其主要功能是將細(xì)胞內(nèi)乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)到胞外,維持腫瘤細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)定。最近發(fā)現(xiàn),MCT4在多種腫瘤中高表達(dá),并與腫瘤的預(yù)后有一定關(guān)系。但在口腔鱗癌中,MCT4的作用研究很少。 研究目的： 1、觀察MCT4在口腔鱗癌中的表達(dá),評(píng)價(jià)MCT4表達(dá)水平與臨床病理以及預(yù)后的關(guān)系； 2、分析MCT4對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響； 3、初步探討MCT4影響口腔鱗癌細(xì)胞增殖、侵襲能力變化的分子生物學(xué)機(jī)制。 材料與方法： 1、MCT4在口腔鱗癌的表達(dá),與臨床病理以及預(yù)后的關(guān)系：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)99例口腔鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本中MCT4的表達(dá)部位、范圍；統(tǒng)計(jì)分析MCT4表達(dá)水平與患者的臨床病理因素的關(guān)系,以及MCT4的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。 2、MCT4在口腔鱗狀細(xì)胞癌中生物學(xué)作用的研究：應(yīng)用Western Blot方法檢測(cè)MCT4在口腔鱗癌細(xì)胞HN4、HN6、HN12、Cal27、SCC9和SCC25-中的表達(dá)水平；RT-RCR和Western Blot方法分別檢測(cè)siRNA干擾后細(xì)胞中MCT4mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)變化；通過乳酸含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)、CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell細(xì)胞遷移侵襲實(shí)驗(yàn)以及劃痕實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定MCT4表達(dá)被抑制后,HN4和HN6乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)能力、增殖能力及遷移侵襲能力的變化。 3、MCT4影響口腔鱗癌細(xì)胞增殖及遷移侵襲能力的分子學(xué)機(jī)制：應(yīng)用Western Blot檢測(cè)siRNA干擾后口腔鱗癌細(xì)胞HN4和HN6中integrin β4以及AKT, FAK-Tyr397, FAK-Tyr925, SRC, MEK和ERK1/2本底及磷酸化蛋白的表達(dá)水平的變化；檢測(cè)siRNA干擾后HN4和HN6中E-cadherin, N-cadherin和vimentin表達(dá)水平的變化。 結(jié)果： 1、免疫組織化學(xué)染色顯示：99例口腔鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本中均檢測(cè)出MCT4表達(dá),MCT4主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜上和/或胞漿；MCT4的表達(dá)與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)有關(guān)；生存分析表明MCT4高表達(dá)組總體生存期以及無瘤生存期都明顯低于低表達(dá)組患者(p＜0.001)。多因素生存分析證實(shí)MCT4是影響口腔鱗癌患者總體生存(p=0.002)和無瘤生存(p=0.003)的獨(dú)立因素。 2、MCT4在口腔鱗癌細(xì)胞系HN4、HN6和SCC9中高表達(dá),Ca127和SCC25中度表達(dá),HN12低表達(dá)；在高表達(dá)MCT4的口腔鱗癌細(xì)胞HN4和HN6中加入MCT4特異性siRNA后,細(xì)胞中MCT4mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著下降,而胞膜上另一個(gè)重要的單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)體MCT1的mRNA水平未見明顯改變； MCT4被特異性沉默后,HN4和HN6的乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)能力、增殖能力、遷移能力以及侵襲能力均顯著下降。 3、口腔鱗癌細(xì)胞HN4和HN6中特異性沉默MCT4后integrin (34及磷酸化的AKT,FAK-Tyr397, FAK-Tyr925, SRC, MEK和ERK1/2的表達(dá)水平均顯著下降,而其本底蛋白水平?jīng)]有明顯改變;RNA干擾后,HN4、HN6中E-cadherin的表達(dá)水平升高,N-cadherin的表達(dá)水平下降,而vimentin的表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化。 結(jié)論： 1、MCT4在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織和細(xì)胞系中均呈高表達(dá),與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)與否及患者的生存率密切相關(guān)。 2、MCT4被特異性沉默后,口腔鱗癌細(xì)胞的增殖及遷移侵襲能力也顯著下降。 3、MCT4可能通過integrin β4-SRC-FAK-MEK-ERK通路影響口腔鱗癌細(xì)胞增殖及遷移侵襲能力;MCT4可影響腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.85

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本文編號(hào)：2372636