【摘要】：唇腭裂是一種高發(fā)病率的先天性遺傳疾病,在胚胎早期發(fā)育的過程中,頜面部正常結(jié)構(gòu)的形成異常所致。唇腭裂通常分為綜合征型唇腭裂和非綜合征型唇腭裂兩類,綜合征型唇腭裂大多屬于單基因遺傳疾病,非綜合征型唇腭裂屬于多基因遺傳疾病,并與環(huán)境因素的影響有關(guān)。 最新的研究發(fā)現(xiàn)8q24.21區(qū)域在歐洲和美洲人群中與非綜合征型唇腭裂有緊密的連鎖關(guān)系,但在亞洲人群中這種關(guān)聯(lián)并不明顯。目前尚未報(bào)道這一區(qū)域與唇腭裂相關(guān)的致病基因。8q24.21區(qū)域在中國中部人群中是否也存在與非綜合征型唇腭裂的緊密連鎖關(guān)系?這一區(qū)域是否存在潛在的唇腭裂致病基因?本研究對這些科學(xué)問題進(jìn)行了研究。 1.中國中部人群的非綜合征型唇腭裂與8q24.21區(qū)域存在緊密連鎖 以中國中部人群的三代以上大家系,兩代核心家系以及散發(fā)病例的唇腭裂樣本為研究對象,依據(jù)HapMap人種異質(zhì)性數(shù)據(jù)選擇了8q24.21區(qū)域中適合中國人群的新的SNP位點(diǎn),并在210例唇腭裂患者和234例正常對照組中進(jìn)行SNP位點(diǎn)分型分析。發(fā)現(xiàn)在8q24.21區(qū)域存在兩個(gè)新的SNP位點(diǎn)rs17241323和rs12546523與唇腭裂存在緊密連鎖關(guān)系。SNP位點(diǎn)rs17241323的C等位基因與唇腭裂存在連鎖關(guān)系,P=0.02285,0.01P=0.022850.05,0R(95%CI)=1.450(1.38-1.53),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯著差異；基因型C/C也與唇腭裂存在連鎖關(guān)系,P=0.0069340.01,0R(95%CI)=1.682(1.56～1.81),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析極顯著差異。SNP位點(diǎn)rs12546523的G等位基因與唇腭裂存在連鎖關(guān)系,P=0.01329,0.01P=0.013290.05,0R(95%CI)=1.526(1.44～1.62),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯著差異；基因型G/G也與唇腭裂存在連鎖關(guān)系, P=0.0042610.01,OR(95%CI)=1.752(1.62～1.89),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析極顯著差異。因此,非綜合征型唇腭裂在中國中部人群中與8q24.21區(qū)域存在緊密連鎖關(guān)系。 2. EST BF691581與單純腭裂的發(fā)生相關(guān) 為了探尋8q24.21區(qū)域是否存在潛在的唇腭裂致病基因,我們用GENESCAN軟件對SNP位點(diǎn)rs17241323和rs12546523附近以及歐美人群中報(bào)道的與唇腭裂緊密連鎖程度最高的SNP位點(diǎn)rs987525、rsl7241253和rs1530300附近的基因組序列進(jìn)行掃描,沒有發(fā)現(xiàn)可能的編碼基因。然后我們對這些區(qū)域的EST序列在不同組織和細(xì)胞系中進(jìn)行半定量分析,結(jié)果顯示BF573425和BF691581在唇部和腭部組織有表達(dá),且BF691581的表達(dá)量較高。通過Northern blot的方法鑒定了BF691581分子的大小,并且結(jié)合RACE分析和cDNA文庫菌落原位雜交的方法獲得了BF691581EST序列。熒光定量PCR結(jié)果提示BF691581在單純腭裂患者中表達(dá)量較高,組織原位雜交實(shí)驗(yàn)表明BF691581表達(dá)在腭板的外層和口腔側(cè)的腭上皮組織,表達(dá)部位與一些已知的唇腭裂候選基因如成纖維生長因9(FGF9),聲猥蛋白(SHH)以及干擾素調(diào)節(jié)因子6(IRF6)相似,提示BF691581可能在胚胎發(fā)育早期促進(jìn)腭板中縫融合的過程中發(fā)揮作用。從細(xì)胞水平分析,BF691581表達(dá)于基底層細(xì)胞中；基底層細(xì)胞是唯一可以分裂的表皮細(xì)胞,可能與顱面部的早期形態(tài)發(fā)育有關(guān)。 3.唇腭裂候選基因TBX225’端調(diào)控區(qū)域一個(gè)新的功能性突變 構(gòu)建了19個(gè)已知的唇腭裂易感基因的啟動(dòng)子的熒光素酶表達(dá)載體,并選擇5個(gè)唇腭裂易感基因IRF6,TBX22,MSX1,BMP4以及FGF8鑒定其核心啟動(dòng)子。在7個(gè)三代以上大家系和22個(gè)兩代核心家系樣本中對這5個(gè)唇腭裂候選基因的核心啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)行測序分析,在一個(gè)三代家系中發(fā)現(xiàn)TBX22的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-73bp處存在一個(gè)G→A點(diǎn)突變；在一個(gè)核心家系中發(fā)現(xiàn)IRF6轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-32bp處存在一個(gè)A→C點(diǎn)突變。其中,TBX22轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-73bp的G→A點(diǎn)突變是一個(gè)有功能的點(diǎn)突變。通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測,這個(gè)G→A點(diǎn)突變位于轉(zhuǎn)錄因子c-ETS-1的結(jié)合序列上；熒光素酶報(bào)告基因分析,TBX22轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-73bp的G→A點(diǎn)突變可以使TBX22核心啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄起始活性顯著下降約三分之一：而TBX22的低表達(dá)曾被證實(shí)是導(dǎo)致X連鎖腭裂綜合征(CPX)的主要原因。因此,提示這個(gè)在一個(gè)三代單純腭裂家系中發(fā)現(xiàn)的新的點(diǎn)突變可能是一個(gè)有功能的點(diǎn)突變。
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【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R782.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

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本文編號：2343265