【摘要】：目的:1、建立大鼠放射性口腔黏膜炎模型,為進一步研究提供動物模型基礎(chǔ)。2、利用建好的大鼠放射性口腔黏膜炎模型,研究醋酸潑尼松龍對大鼠口腔上皮中β防御素(rBD2、rBD3)及MAPKp38、NF-κBp65、IL-1β、IL-6、TNF-α表達水平的影響,以初步探討醋酸潑尼松龍影響β防御素的可能機制。方法:1、選取45只SD大鼠,隨機分為9組;其中8組為實驗組,用~(~(60))Coγ射線以35Gy劑量單次照射大鼠口鼻部;另1組為空白對照組,不作處理。每天觀察大鼠舌黏膜狀況,并對拒食的大鼠進行灌注流食喂養(yǎng)。分別于放射后1、3、5、7、10、14、21、28天處死一組實驗組大鼠,對照組于28天處死,取舌黏膜組織進行HE染色和顯微鏡下觀察。2、選取30只SD大鼠建立放射性口腔黏膜炎模型,隨機分為醋酸潑尼松龍?zhí)幚斫M(PA組)和生理鹽水對照組(NS組)。在炎癥初始期(放射后第5天),PA組:醋酸潑尼松龍注射液局部噴灑,每次約0.1ml(0.1mg),3次/d,共3d。NS組:生理鹽水局部噴灑,每次約0.1ml(0.1mg),3次/d,共3d。每組在用藥(或生理鹽水)結(jié)束后的第1d、4d、7d分別處死5只大鼠,處死前觀察每只大鼠的舌黏膜狀況,取舌體組織,用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測rBD2、rBD3、MAPKp38、NF-κBp65、IL-1β、IL-6、TNF-α在上皮中的表達水平,并用IPP6.0軟件測量記錄其平均光密度值。所得數(shù)據(jù)用SPSS20.0軟件統(tǒng)計分析,各PA組和NS組的平均光密度值差異用析因設(shè)計的方差分析,組間差異比較采用兩樣本t檢驗,組內(nèi)差異比較采用單因素方差分析,各檢測因子之間表達水平的關(guān)系用pearson積差相關(guān)系數(shù)表示。結(jié)果:1、大鼠放射性口腔黏膜炎模型建立及觀察結(jié)果:放射后5~6天,大鼠口腔黏膜出現(xiàn)紅腫伴有小面積潰瘍;7~8天小潰瘍逐漸融合成大面積潰瘍;并持續(xù)到9~13天;14天開始,潰瘍逐漸縮小愈合;21~28天潰瘍完全愈合。HE染色顯示:放射后第5天,黏膜下層出現(xiàn)大量炎性細胞浸潤,但上皮層連續(xù)完整;第7、10天,上皮層崩解、脫落;第14天潰瘍底部可見新生肉芽組織及新生毛細血管;第21、28天,潰瘍處有新的上皮組織出現(xiàn),基底層排列緊密。2、醋酸潑尼松龍對放射性口腔黏膜炎及大鼠口腔上皮β防御素及部分相關(guān)因子表達水平的影響2.1醋酸潑尼松龍對大鼠放射性口腔黏膜炎的影響觀察:結(jié)束用藥(或生理鹽水)的第1d,NS組中大鼠舌黏膜出現(xiàn)大面積的潰瘍;而PA組中大鼠的舌黏膜同樣出現(xiàn)了潰瘍,但面積較NS組中小。第4d,NS組中大鼠舌黏膜潰瘍持續(xù);而PA組中潰瘍周圍出現(xiàn)愈合癥狀。第7d,NS組中大鼠舌黏膜潰瘍周圍出現(xiàn)愈合現(xiàn)象;而PA組中潰瘍大部分愈合。2.2 rBD2的表達:上皮各層細胞胞質(zhì)均可見rBD2著色。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間rBD2染色平均光密度值有顯著性差異(F=7.392,P=0.012),同組不同時間點之間有差異(F=7.016,P=0.004),組別和時間不存在交互效應(yīng)(F=2.312,P=0.121)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:7d,PA組大鼠口腔上皮組織的rBD2平均光密度值顯著低于NS組(P=0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:NS組中rBD2平均光密度值隨時間先降低后升高(P=0.001)。2.3 rBD3的表達:上皮各層細胞胞質(zhì)均可見rBD3著色。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間rBD3染色平均光密度值有顯著性差異(F=49.586,P0.001),同組不同時間點之間有差異(F=86.777,P0.001),組別和時間存在交互效應(yīng)(F=76.~(60)4,P0.001)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:4d、7d,PA組大鼠口腔上皮組織的rBD3平均光密度值顯著低于NS組(4d:P=0.007,7d:P=0.018)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:PA組和NS組中,rBD3平均光密度值隨時間一直降低(PA組:P0.001,NS組:P0.001)。2.4 MAPKp38的表達:上皮各層細胞胞質(zhì)均可見MAPKp38表達。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間MAPKp38染色平均光密度值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=9.081,P=0.006),而同組不同時間點之間也有差異(F=45.062,P0.001),組別和時間存在交互效應(yīng)(F=38.152,P0.001)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:各時間點PA組和NS組見比較均有明顯差異;在1d,PA組較NS組的MAPKp38平均光密度值有所增高(P0.001);而在4d和7d,PA組的MAPKp38平均光密度值較NS組低(4d:P=0.040,7d:P0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:在PA組和NS組中MAPKp38平均光密度值隨時間先降低后升高(PA組:P0.001,NS組:P0.001)。2.5 NF-κBp65的表達:上皮各層的細胞胞核和部分胞質(zhì)均可見NF-κBp65表達。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間NF-κBp65染色平均光密度值有明顯差異(F=5.680,P=0.025),而同組不同時間點之間有差異(F=138.259,P0.001),組別和時間存在交互效應(yīng)(F=41.801,P0.001)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:在1d,PA組蛋白平均光密度值較NS組要高(P=0.001),而在4d和7d,PA組蛋白平均光密度值低于NS組(4d:P=0.021,7d:P0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:在PA組中NF-κBp65蛋白平均光密度值隨時間有降低的趨勢(P0.001),而NS組中蛋白平均光密度值先降低后增高(P0.001)。2.6 IL-1β的表達:上皮各層細胞胞質(zhì)均可見IL-1β表達。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間IL-1β染色平均光密度值有顯著性差異(F=5.014,P=0.035),同組不同時間點之間有差異(F=149.023,P0.001),組別和時間存在交互效應(yīng)(F=5.251,P=0.013)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:7d時間點PA組大鼠口腔上皮組織的IL-1β平均光密度值顯著低于NS組(P0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:IL-1β平均光密度值隨時間有降低的趨勢(PA組:P0.001,NS組:P0.001)。2.7 IL-6的表達:上皮各層細胞胞質(zhì)均可見IL-6表達。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間IL-6染色平均光密度值有顯著性差異(F=21.821,P0.001),同組不同時間點之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=1.655,P=0.212),組別和時間存在交互效應(yīng)(F=8.831,P=0.001)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:4d、7d時間點PA組大鼠口腔上皮組織的IL-6平均光密度值顯著低于NS組(4d:P=0.009,7d:P0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:PA組中IL-6平均光密度值隨時間有降低(P=0.002)。2.8 TNF-α表達:上皮各層細胞胞質(zhì)均可見TNF-α表達。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間TNF-α染色平均光密度值無明顯差異(F=0.989,P=0.330),而同組不同時間點之間有差異(F=4.322,P=0.025),組別和時間不存在交互效應(yīng)(F=1.401,P=0.266)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:各時間點PA組和NS組見比較無明顯差異。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:在N S組中TNF-α平均光密度值隨時間有降低的趨勢(P0.001)。3、放射性口腔黏膜炎大鼠口腔上皮中β防御素(rBD2、rBD3)與MAPKp38、NF-κBp65及炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)之間平均光密度的相關(guān)關(guān)系:rBD2的表達與MAPKp38(r=0.554,P=0.002)呈正相關(guān),與NF-κBp65(r=0.508,P=0.004)呈正相關(guān),與IL-1β(r=0.552,P=0.002)呈正相關(guān),與IL-6(r=0.427,P=0.018)呈正相關(guān),但與TNF-α間無明顯相關(guān)性(r=0.278,P=0.137)。rBD3的表達與MAPKp38間呈正相關(guān)性(r=0.554,P=0.002),與NF-κBp65(r=0.383,P=0.037)呈正相關(guān),與IL-1β(r=0.538,P=0.002)呈正相關(guān),與IL-6(r=0.503,P=0.005)呈正相關(guān),但與TNF-α間無明顯相關(guān)性(r=0.140,P=0.462)。結(jié)論:經(jīng)~(60)Coγ射線照射35Gy可成功建立大鼠放射性口腔黏膜炎模型。在該模型中,醋酸潑尼松龍能減輕口腔黏膜炎的嚴重程度,降低口腔上皮中rBD2、rBD3和MAPKp38、NF-κBp65、IL-1β、IL-6的表達,MAPKp38、NF-κBp65信號通路可能在醋酸潑尼松龍對rBD2、rBD3的抑制作用中發(fā)揮一定的作用。
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【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R781.5

【參考文獻】

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1 王Q忕，

本文編號：2278760