【摘要】：目的:分析比較Ⅰ、Ⅱ fimA型牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白(P.gingivalis-rFimA)對人臍動脈平滑肌細(xì)胞(HUASMCs)的增殖、遷移能力以及表型轉(zhuǎn)化的影響,探討不同fimA型P.gingivalis-rFimA的侵襲在動脈粥樣硬化(As)發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用。方法:1、體外培養(yǎng)的HUASMCs,加入96孔培養(yǎng)板,采用CCK-8檢測不同終濃度的P.gingivalis-rFimA(0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)在2h、8h、24h、48h對平滑肌細(xì)胞增殖的影響,酶標(biāo)儀450nm處測定各組OD值,并確定rFimA促增殖效應(yīng)的最適濃度。2.采用上述確定最適濃度10μg/ml的P.gingivalis-rFimA,與HUASMCs共培養(yǎng)2h、8h、24h、48h后,通過Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測HUASMCs的遷移情況,透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),流式細(xì)胞術(shù)檢測收縮型標(biāo)志蛋白平滑肌肌球蛋白重鏈(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)和合成型標(biāo)志細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白-1(cellular retinol bindingprotein-1,CRBP-1)的表達(dá)變化情況。結(jié)果:1、在不同時間點(diǎn),Ⅰ型和Ⅱ型P.gingivalis-rFimA組的促HUASMCs增殖作用均比陰性對照組強(qiáng),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。隨著濃度的增加Ⅰ型和Ⅱ型P.gingivalis-rFimA組的促HUASMCs增殖作用也增強(qiáng)(P0.05)。在同一刺激濃度和作用時間點(diǎn),Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激HUASMCs增殖作用強(qiáng)于Ⅰ型P.gingivalis-rFimA(P0.05)。2、在不同時間點(diǎn),Ⅰ和Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目均比陰性對照組多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。隨著時間延長,各組的HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目增多;2h時,Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目要多于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在8h、24h和48h時,Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細(xì)胞數(shù)目要多于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、通過電鏡觀察,在Ⅰ、Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組2h、8h時HUASMCs出現(xiàn)明顯的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、糖原、線粒體、吞噬體和溶酶體的增多,細(xì)胞器有不同程度的腫脹;Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組在各個觀察點(diǎn)均可觀察到脂滴的出現(xiàn);Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組則在24h和48h時,細(xì)胞器開始溶解、大部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)出現(xiàn)破壞。4、在不同時間點(diǎn),Ⅰ和Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激后,均能觀察到HUASMCs的合成型標(biāo)志分子CRBP-1的表達(dá)上調(diào),收縮型標(biāo)志分子SM-MHC的表達(dá)下調(diào),而Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA組上調(diào)CRBP-1表達(dá)的作用強(qiáng)于于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組,在24h和48h Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA組下調(diào)SM-MHC表達(dá)的作用強(qiáng)于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組(P0.05)。結(jié)論:Ⅰ、Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA均能刺激平滑肌細(xì)胞使其表型由收縮型轉(zhuǎn)化為具有分泌功能的合成型,并促進(jìn)其增殖和遷移能力,提示Ⅰ、Ⅱ fimA型P.gingivalis及其毒力因子FimA的感染和侵襲可能會引起平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為的異常,從而在As的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮一定作用;而不同fimA型P.gingivalis-rFimA對平滑肌細(xì)胞的促增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)換作用存在一定的差異。
[Abstract]:Aim: to compare the effects of P.gingivalis-rFimA of type 鈪，

本文編號：2267782