【摘要】：目的:探討b FGF、IGF1、BMP4、TGF-β1聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠牙源性間充質(zhì)細(xì)胞(rat dental mesenchymal cells,r DMCs)成牙本質(zhì)分化的影響。方法 :應(yīng)用酶消化法和差速消化法分離、培養(yǎng)大鼠牙源性上皮細(xì)胞(r DECs)和r DMCs,經(jīng)cytokeratin、vimentin免疫熒光染色鑒定其來(lái)源。應(yīng)用茜素紅染色、Gomori鈣-鈷法檢測(cè)礦化液誘導(dǎo)下r DMCs的礦化能力。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色、圖像分析、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western印跡法檢測(cè)在b FGF+IGF1(組1)、TGF-β1+BMP4(組2)、b FGF+IGF1+TGF-β1+BMP4(組3)分別誘導(dǎo)下r DMCs中DSPP、CAP、OPN、OCN的表達(dá)差異。采用SPSS14.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:成功分離培養(yǎng)、鑒定r DECs和r DMCs,經(jīng)礦化液誘導(dǎo)后的r DMCs鈣結(jié)節(jié)和ALP染色陽(yáng)性。組1、2中,DSPP、CAP、OPN、OCN m RNA和蛋白的表達(dá)水平均顯著高于空白對(duì)照組4,差異顯著(P0.01),其中組1 CAP、OCN和組2 DSPP、OPN的表達(dá)水平最高。結(jié)論:r DMCs經(jīng)礦化誘導(dǎo)后具有成骨特性。b FGF+IGF1顯著促進(jìn)CAP、OCN的表達(dá),加速r DMCs向成牙骨質(zhì)細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化與牙骨質(zhì)基質(zhì)、骨基質(zhì)的礦化;TGF-β1+BMP4顯著促進(jìn)DSPP、OPN的表達(dá),加速r DMCs向成牙本質(zhì)細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化與牙本質(zhì)基質(zhì)、骨基質(zhì)的礦化,顯示其成骨趨向。4種因子聯(lián)合應(yīng)用,并不具備顯著的協(xié)同作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of b FGF,IGF1,BMP4,TGF- 尾 1 on odontoblast differentiation of rat odontoblast (rat dental mesenchymal cells,r DMCs. Methods: cultured rat odontogenic epithelial cells (r DECs) and r DMCs,) were isolated by enzyme digestion and differential digestion. Their origin was identified by cytokeratin,vimentin immunofluorescence staining. The mineralizing ability of r DMCs induced by mineralized solution was determined by alizarin red staining method. Immunohistochemical staining, image analysis, real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting were used to detect the difference of DSPP,CAP,OPN,OCN expression in r DMCs induced by b FGF IGF1 (group 1), TGF- 尾 1 BMP4 (group 2) and b FGF IGF1 TGF- 尾 1 BMP4 (group 3). The data were analyzed by SPSS14.0 software package. Results: r DECs and r DMCs, were isolated and cultured successfully. R DMCs calcium nodule and ALP staining were detected by mineralized solution. The expression levels of OCN m RNA and protein in group 1 were significantly higher than those in control group 4 (P0.01). The expression level of OCN m in group 1 and group 2 was the highest. The expression level of OCN m in group 1 and group 2 was higher than that in control group (P0.01). The expression level of OCN m in group 1 and group 2 was the highest. Conclusion the osteogenic property. BFGF IGF1 of fraction r DMCs can significantly promote the expression of CAP,OCN, accelerate the differentiation of r DMCs into cementoblasts, differentiation of osteoblasts and cemental matrix, and mineralization of bone matrix TGF- 尾 1 BMP4 can significantly promote the expression of DSPP,OPN. Accelerating the differentiation of r DMCs into odontoblast, osteoblast differentiation and mineralization of dentin matrix and bone matrix showed that there was no significant synergistic effect between r DMCs and osteoblasts.
【作者單位】： 解放軍濟(jì)南軍區(qū)第401醫(yī)院口腔科;解放軍總醫(yī)院口腔科;
【基金】：中國(guó)博士后科學(xué)基金特別資助課題(201003774)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R781

【參考文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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6 彭U，

本文編號(hào)：2216076