本文選題：沖擊波 + 人牙周韌帶細(xì)胞��； 參考：《福建醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的通過體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察不同強(qiáng)度、次數(shù)沖擊波對(duì)人牙周韌帶細(xì)胞增殖、粘附、遷移、炎癥因子表達(dá)、向成骨細(xì)胞分化及表面干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)等生物學(xué)行為的影響。方法實(shí)驗(yàn)一:(1)根據(jù)接受沖擊波不同強(qiáng)度、次數(shù)將人牙周韌帶細(xì)胞分為9組,沖擊波強(qiáng)度分別采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,沖擊次數(shù)采用100、300及500次。未接受沖擊波處理的細(xì)胞作為空白對(duì)照組。采用MTT法及CCK-8法檢測細(xì)胞在接受沖擊處理24、48、72h時(shí)的增殖情況。(2)根據(jù)接受沖擊波不同強(qiáng)度、次數(shù)將細(xì)胞分為5組,沖擊次數(shù)采用100次時(shí)沖擊波強(qiáng)度分別采用0.05、0.10、0.19m J/mm2,沖擊波強(qiáng)度采用0.05 m J/mm2時(shí)沖擊次數(shù)分別采用100、300及500次。未接受沖擊波處理的細(xì)胞作為空白對(duì)照組。利用細(xì)胞附著實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞在接受沖擊后1、2、4及8h時(shí)細(xì)胞附壁情況;q RT-PCR檢測細(xì)胞在沖擊處理1、2、4、8、24h后ICAM-1 m RNA表達(dá);細(xì)胞劃痕傷口愈合實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞受到?jīng)_擊后72h內(nèi)細(xì)胞遷移情況;采用細(xì)胞遷移小室觀察沖擊處理細(xì)胞18h后細(xì)胞遷移情況;采用實(shí)時(shí)監(jiān)測顯微鏡下觀察細(xì)胞120h內(nèi)運(yùn)動(dòng)情況。實(shí)驗(yàn)二:根據(jù)接受沖擊波不同強(qiáng)度、次數(shù)將細(xì)胞分為5組,沖擊次數(shù)采用100次時(shí)沖擊波強(qiáng)度分別采用0.05、0.10、0.19m J/mm2,沖擊波強(qiáng)度采用0.05 m J/mm2時(shí)沖擊次數(shù)分別采用100、300及500次。未接受沖擊波處理的細(xì)胞作為空白對(duì)照組。q RT-PCR檢測細(xì)胞接受沖擊處理1、2、4、8、24h后IL-6,IL-8,MCP-1,TNF-αm RNA表達(dá)。ELISA檢測細(xì)胞在1、2、4、8、24h后IL-6,IL-8蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)三:根據(jù)接受沖擊波不同強(qiáng)度、次數(shù)將細(xì)胞分為5組,沖擊次數(shù)采用100次時(shí)沖擊波強(qiáng)度分別采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,沖擊波強(qiáng)度采用0.05 m J/mm2時(shí)沖擊次數(shù)分別采用100、300及500次。未接受沖擊波處理的細(xì)胞作為空白對(duì)照組。檢測沖擊處理后3~9d細(xì)胞堿性磷酸酶活性。10、16、21d后茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié)形成情況。q RT-PCR檢測細(xì)胞接受沖擊處理6、7、8、9、10d后BMP2、ALP、OPG、VEGF、RUNX2、COL1A1的m RNA表達(dá)。實(shí)驗(yàn)四:根據(jù)接受沖擊波不同強(qiáng)度、次數(shù)將細(xì)胞分為5組,沖擊次數(shù)采用100次時(shí)沖擊波強(qiáng)度分別采用0.05、0.10、0.19 m J/mm2,沖擊波強(qiáng)度采用0.05 m J/mm2時(shí)沖擊次數(shù)分別采用100、300及500次。未接受沖擊波處理的細(xì)胞作為空白對(duì)照組。檢測沖擊處理h PDLCs干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD73、CD90、CD105及CD146表達(dá)情況。結(jié)果實(shí)驗(yàn)一:采用強(qiáng)度為0.05、0.10、0.19m J/mm2,次數(shù)為100、300及500次的沖擊波對(duì)h PDLCs細(xì)胞增殖無明顯影響。強(qiáng)度在0.05~0.19m J/mm2,沖擊次數(shù)在100~500之間的沖擊波可降低h PDLCs的早期附壁能力,但可促進(jìn)其后期的附壁能力;沖擊強(qiáng)度與h PDLCs的附壁能力正相關(guān),而沖擊次數(shù)的變化對(duì)細(xì)胞附壁能力影響不明顯。沖擊波可在初期抑制h PDLCs細(xì)胞ICAM-1 m RNA表達(dá),而在后期(8~24hr)可上調(diào)h PDLCs細(xì)胞ICAM-1 m RNA表達(dá)。所有接受沖擊處理的細(xì)胞其遷移能力均明顯增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)二:在沖擊處理后的早期h PDLCs細(xì)胞IL-6,IL-8,MCP-1,TNF-αm RNA表達(dá)水平均受到抑制,在沖擊處理的后期細(xì)胞炎癥相關(guān)因子m RNA表達(dá)水平與接收沖擊的次數(shù)及強(qiáng)度相關(guān)。實(shí)驗(yàn)三:沖擊波對(duì)h PDLCs成骨方向分化作用不明顯。沖擊波在觀測期的大部分時(shí)間點(diǎn)均抑制ALP及OPG m RNA表達(dá);在前期抑制COL1A1 m RNA表達(dá),而在后期促進(jìn)其表達(dá);同樣,沖擊波在前期下調(diào)VEGF m RNA表達(dá)而在后期可上調(diào)其表達(dá)。沖擊波對(duì)BMP-2 m RNA表達(dá)影響不明顯。實(shí)驗(yàn)四:沖擊波能明顯影響h PDLCs細(xì)胞表面干細(xì)胞標(biāo)志物CD73、CD90、CD105及CD146的表達(dá)水平,其作用與沖擊波強(qiáng)度及次數(shù)均有明顯關(guān)系。低次數(shù)(100次)、低能量(0.05m J/mm2)沖擊波對(duì)促進(jìn)h PDLCs細(xì)胞CD73、CD90及CD146表達(dá)效果最佳。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)條件下不同強(qiáng)度及次數(shù)沖擊波對(duì)細(xì)胞增殖無明顯影響。沖擊波可降低h PDLCs的早期附壁能力,但可促進(jìn)其后期的附壁能力;沖擊波可促進(jìn)細(xì)胞遷移;沖擊波對(duì)h PDLCs成骨方向分化作用不明顯。低強(qiáng)度、低次數(shù)沖擊波可明顯促進(jìn)h PDLCs干細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of different intensity and frequency shock wave on the proliferation , adhesion , migration , inflammatory factor expression , differentiation of osteoblast and expression of surface stem cell markers in human periodontal ligament cells by in vitro cytotoxicity experiment . The expression of IL - 6 , IL - 8 , MCP - 1 and TNF - 偽 mRNA in cells after shock treatment were observed . The results showed that the intensity of shock wave was 0.05 , 0.10 , 0.19 mJ / mm2 , and the intensity of shock wave was 0.05 , 0.10 , 0.19 mJ / mm2 , and the intensity of shock wave was 0.05 , 0.10 , 0.19 mJ / mm2 , respectively . The expression of CD73 , CD90 , CD105 and CD146 in h - PDLCs was significantly affected by shock wave at most of the time points of observation period . The results showed that shock wave could significantly affect the expression of CD73 , CD90 and CD146 in h - PDLCs .
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781

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本文編號(hào)：2099529