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銀杏葉提取物對破骨細胞分化和骨吸收的作用及其機制

發(fā)布時間:2018-07-01 12:48

  本文選題:銀杏葉提取物 + 破骨細胞; 參考:《吉林大學學報(醫(yī)學版)》2017年06期


【摘要】:目的:探討不同濃度銀杏葉提取物(GBE)對破骨胞分化和骨吸收的作用,并闡明其作用機制。方法:體外培養(yǎng)RAW264.7細胞,采用核因子κB受體活化因子配體(RANKL)和不同濃度GBE處理細胞,分為空白對照組(0μg·L~(-1) RANKL)、RANKL組(100μg·L~(-1) RANKL)和RANKL+75 mg·L~(-1) GBE和RANKL+150mg·L~(-1) GBE組?咕剖崴嵝匀旧(TRAP)法觀察各組破骨細胞的形態(tài)及數(shù)量,骨吸收陷窩面積評估GBE對破骨細胞骨吸收能力的影響,流式細胞術檢測細胞凋亡率及細胞周期,RT-PCR法檢測RAW264.7細胞中破骨細胞相關基因活化T細胞核因子c1(NFATc1)、樹突狀細胞特異性跨膜蛋白(DCSTAMP)、組織蛋白酶K(Cathepsin K)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、B淋巴細胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相關X蛋白(Bax)、P27和細胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)的表達水平。結果:與空白對照組比較,RANKL組破骨細胞的數(shù)量明顯增加(P0.05);與RANKL組比較,RANKL+75mg·L~(-1) GBE和RANKL+150mg·L~(-1)GBE組破骨細胞數(shù)量明顯降低(P0.05)。與空白對照組比較,RANKL組骨片中骨吸收陷窩面積明顯升高(P0.05);與RANKL組比較,RANKL+75mg·L~(-1) GBE和RANKL+150mg·L~(-1) GBE組骨片中骨吸收陷窩面積明顯降低(P0.05)。與空白對照組比較,75和150 mg·L~(-1) GBE組RAW264.7細胞凋亡率升高(P0.05),RAW264.7細胞中Bcl-2基因表達水平明顯降低(P0.05),Bax基因表達水平明顯升高(P0.05)。與RANKL組比較,RANKL+75 mg·L~(-1) GBE和RANKL+150 mg·L~(-1) GBE組RAW264.7細胞G0-G1期阻滯明顯縮短(P0.05);RAW264.7細胞中P27基因表達水平明顯降低(P0.05),Cyclin-D1基因表達水平明顯升高(P0.05)。與空白對照組比較,RANKL組RAW264.7細胞中破骨細胞相關基因NFATc1、DC-STAMP、Cathepsin K和MMP-9表達水平明顯升高(P0.05);與RANKL組比較,RANKL+75mg·L~(-1) GBE和RANKL+150 mg·L~(-1) GBE組RAW264.7細胞中破骨細胞相關基因NFATc1、DCSTAMP、Cathepsin K和MMP-9表達水平明顯降低(P0.05)。結論:GBE可抑制破骨細胞分化和骨吸收能力,其機制可能與促進RAW264.7細胞凋亡、縮短RANKL誘導的RAW264.7細胞的G0-G1期有關。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of different concentrations of Ginkgo biloba extract (GBE) on osteoclast differentiation and bone resorption and to elucidate its mechanism. Methods: RAW264.7 cells were cultured in vitro and treated with nuclear factor 魏 B receptor activating factor ligand (RANKL) and different concentrations of GBE. The cells were divided into blank control group (0 渭 g L ~ (-1) RANKL group (100 渭 g L ~ (-1) RANKL), RANKL 75 mg L ~ (-1) GBE group and RANKL 150mg L ~ (-1) GBE group. The morphology and number of osteoclasts in each group were observed by tartrate-resistant acid staining (trap) and the area of bone resorption lacunae was used to evaluate the effect of GBE on osteoclast bone resorption. Detection of apoptosis rate and cell cycle RT-PCR in RAW264.7 cells using flow cytometry to detect osteoclast-associated gene activated T cell nuclear factor C1 (NFATc1), dendritic cell-specific transmembrane protein (DCSTAMP), cathepsin K (cathepsin K) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) B The expression levels of Bcl-2 associated X protein (Bax) P27 and cyclin D1 (Cyclin-D1) in lymphocytoma 2 (Bcl-2). Results: compared with the blank control group, the number of osteoclasts in RANKL group was significantly increased (P0.05), and the number of osteoclasts in RANKL 75mg L-1 GBE and RANKL 150mg L-1 GBE groups was significantly lower than that in RANKL 75mg L-1 GBE group (P0.05). Compared with the blank control group, the area of bone resorption lacunae in RANKL 75mg L-1 GBE and RANKL 150mg L-1 GBE group was significantly higher than that in RANKL group (P0.05), and the bone resorption lacuna area in RANKL 75mg L-1 GBE group was significantly lower than that in RANKL 150mg L-1 GBE group (P0.05). Compared with the blank control group, the apoptosis rate of RAW264.7 cells in 75 and 150 mg / L GBE groups was increased (P0.05). The expression of Bcl-2 gene in RAW264.7 cells was significantly decreased (P0.05) and the expression level of Bax gene in RAW264.7 cells was significantly increased (P0.05). Compared with RANKL group (75 mg L ~ (-1) GBE) and RANKL 150 mg L ~ (-1) GBE group, the G0-G1 phase arrest of RAW264.7 cells was significantly shortened (P0.05) the expression level of P27 gene in RAW264.7 cells was significantly decreased (P0.05) and the expression level of Cyclin-D1 gene in RAW264.7 cells was significantly increased (P0.05). Compared with the control group, the expression of osteoclast associated gene NFATc1DC-STAMPP Cathepsin K and MMP-9 in RAW264.7 cells in RANKL group was significantly higher than that in RAW264.7 cell group (P0.05), and the expression levels of osteoclast associated genes NFATc1DCSTAMPP Cathepsin K and MMP-9 in RAW264.7 cells were significantly decreased in RAW264.7 cells compared with RANKL 75mg L-1 GBE and RANKL 150mg L-1 GBE group (P0.05). Conclusion the cell differentiation and bone resorption of RAW264.7 cells can be inhibited by 1: GBE, which may be related to the promotion of RAW264.7 cell apoptosis and the shortening of G0-G1 phase of RAW264.7 cells induced by RANKL.
【作者單位】: 吉林大學口腔醫(yī)院修復科;廣州醫(yī)科大學附屬口腔醫(yī)院修復科;
【基金】:廣東省教育廳科研項目資助課題(B16036078) 吉林省科技廳科研項目資助課題(20140204022SF) 廣州醫(yī)科大學青年科研項目資助課題(2015A32)
【分類號】:R78

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本文編號:2087839

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