本文選題：顳下頜關(guān)節(jié)炎癥 + 疼痛　； 參考：《蘇州大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景 硫化氫（H2S）是繼NO、CO后的第三種新型氣體信使，，在哺乳動物體內(nèi)作為一種內(nèi)源性氣體分子發(fā)揮著非常重要的生理病理作用，但其是否在關(guān)節(jié)炎癥疼痛中也起著調(diào)制作用還鮮有報(bào)道。本研究正是基于探究內(nèi)源性硫化氫（H2S）在顳下頜關(guān)節(jié)炎癥疼痛模型中的作用及其分子機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法 1.6~8周齡的SD雄性大鼠的顳下頜關(guān)節(jié)腔注射完全弗氏佐劑（completeFreund’s adjuvant，CFA）從而誘導(dǎo)SD大鼠的顳下頜關(guān)節(jié)炎癥疼痛模型。運(yùn)用VFF（Von Frey filaments）的方法來評測SD大鼠的行為學(xué)疼痛閾值反應(yīng)。 2.運(yùn)用逆行標(biāo)記的熒光素（DiI）來標(biāo)記支配顳下頜關(guān)節(jié)（temporomandibularjoint，TMJ）的特異性三叉神經(jīng)節(jié)（trigeminal ganglion，TG）神經(jīng)元，運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗方法研究炎癥組SD大鼠TMJ特異性TG神經(jīng)元興奮性，電壓依賴性鉀通道特性以及ATP電流的變化。 3.運(yùn)用Western Blotting方法檢測顳下頜關(guān)節(jié)炎癥疼痛模型SD大鼠TMJ特異性TG神經(jīng)元中硫化氫合酶CBS和CSE的蛋白以及P2X3R表達(dá)情況。 4.運(yùn)用Quantitative Real-time PCR檢測顳下頜關(guān)節(jié)炎癥疼痛模型SD大鼠顳下頜特異性TG神經(jīng)元中硫化氫合酶CBS mRNA的表達(dá)情況。 5.運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測SD大鼠TG神經(jīng)元中CBS和P2X3R蛋白共表達(dá)情況。 結(jié)果 1. CFA能夠顯著降低SD大鼠顳下頜關(guān)節(jié)的機(jī)械性疼痛閾值，并且這一現(xiàn)象是與TG神經(jīng)元內(nèi)硫化氫合酶CBS蛋白及mRNA的表達(dá)上調(diào)相關(guān)聯(lián)的。 2.對SD大鼠注射硫化氫合酶CBS的抑制劑AOAA后，發(fā)現(xiàn)AOAA能夠顯著的翻轉(zhuǎn)炎癥組SD大鼠的疼痛閾值，并呈現(xiàn)劑量和時間上的依賴性。而作為對照，AOAA并不能夠?qū)φ战MSD大鼠的疼痛閾值產(chǎn)生作用。 3.采用全細(xì)胞電生理膜片鉗技術(shù)對顳下頜關(guān)節(jié)特異性TG神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行記錄后發(fā)現(xiàn)，連續(xù)給予炎癥組SD大鼠AOAA能夠翻轉(zhuǎn)CFA引起的顳下頜關(guān)節(jié)特異性TG神經(jīng)元細(xì)胞的興奮性增強(qiáng)，電壓門控型鉀通道的電流密度的減小以及ATP電流密度的增大。 4.為了進(jìn)一步確認(rèn)CBS-H2S信號通路在CFA誘導(dǎo)的顳下頜關(guān)節(jié)炎癥性疼痛模型中發(fā)揮的作用，硫氫化鈉被用來模擬CBS產(chǎn)生的硫化氫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)NaHS能夠顯著的增加正常SD大鼠顳下頜關(guān)節(jié)特異性TG神經(jīng)元的興奮性。 5.運(yùn)用免疫組化的實(shí)驗(yàn)方法檢測后發(fā)現(xiàn)硫化氫合酶CBS與P2X3R在TG神經(jīng)元中能夠共表達(dá)。而且運(yùn)用Western Blotting的方法進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn)，連續(xù)給予炎癥組SD大鼠AOAA能夠顯著翻轉(zhuǎn)CFA引起的TG神經(jīng)元中的P2X3R表達(dá)的上調(diào)。 結(jié)論 我們的研究結(jié)果表明，內(nèi)源性硫化氫（H2S）合酶CBS表達(dá)的上調(diào)可能在SD大鼠顳下頜關(guān)節(jié)炎癥疼痛過程中扮演著重要的角色。因此，本研究能夠在一定程度上揭示顳下頜關(guān)節(jié)炎癥疼痛產(chǎn)生的分子機(jī)制，從而為炎癥疼痛的治療提供更為有效的治療方案。
[Abstract]:Background hydrogen sulfide (H _ 2S) is the third new gas messenger after NO-CO and plays a very important role in physiology and pathology as an endogenous gas molecule in mammals. But whether it also plays a modulating role in arthritis pain is rarely reported. The purpose of this study was to explore the role of endogenous hydrogen sulfide (H _ 2S) in temporomandibular arthritis (TMJ) pain model and its molecular mechanism. Methods the temporomandibular arthritis pain model of SD rats was induced by injecting complete Freundant adjuvant CFAA into the temporomandibular joint (TMJ) of male SD rats at the age of 1.6 weeks. The behavioral pain threshold response of SD rats was evaluated by VFFFV on Frey filaments. 2. 2. The specific trigeminal ganglion (TGG) neurons innervating temporomandibular joint (TMJ) were labeled with retrograde fluorescein (Dii). The excitability of TMJ specific TG neurons in inflammatory group was studied by whole-cell patch clamp method. Characteristics of voltage-dependent potassium channels and changes of ATP currents. 3. Western blotting was used to detect the expression of hydrogen sulfide synthase CBS and CSE and P2X3R in TMJ specific TG neurons of SD rat model of temporomandibular arthritis pain. 4. The expression of hydrogen sulfide synthase (CBS) mRNA in temporomandibular specific TG neurons was detected by quantitative Real-time PCR in SD rats with temporomandibular arthritis pain model. The co-expression of CBS and P2X 3R protein in TG neurons of SD rats was detected by immunohistochemistry. Result 1. CFA can significantly reduce the mechanical pain threshold of temporomandibular joint in SD rats, and this phenomenon is associated with the up-regulation of the expression of H2S CBS protein and mRNA in TG neurons. After injection of AOAA, an inhibitor of hydrogen sulfide synthase (CBS), it was found that AOAA could significantly reverse the pain threshold of SD rats in inflammatory group, and showed a dose-dependent and time-dependent manner. AOAA, as a control group, did not have an effect on the pain threshold of SD rats in the control group. Using whole-cell electrophysiological patch clamp technique to record the temporomandibular joint specific TG neurons, it was found that AOAA could reverse the excitability of temporomandibular joint specific TG neurons induced by CFA. The decrease of current density and the increase of ATP current density in voltage-gated potassium channels. 4. In order to further confirm the role of CBS-H2S signaling pathway in CFA induced temporomandibular arthritis (TMJ) pain model, sodium sulfide was used to simulate hydrogen sulfide produced by CBS. The results showed that NaHS could significantly increase the excitability of temporomandibular joint specific TG neurons in normal SD rats. The expression of hydrogen sulfide synthase CBS and P2X3R in TG neurons was detected by immunohistochemistry. Furthermore, Western blotting was used to detect the up-regulation of P2X3R expression in TG neurons induced by CFA in SD rats treated with continuous injection of AOAA. Conclusion our results suggest that the up-regulated expression of endogenous hydrogen sulfide (H2S) synthase CBS may play an important role in the process of temporomandibular arthritis (TMJ) pain in SD rats. Therefore, to some extent, this study can reveal the molecular mechanism of temporomandibular arthritis pain, so as to provide a more effective treatment for inflammatory pain.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R782.6

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本文編號：2038027