本文選題：腺相關(guān)病毒 + shRNA-Snail��； 參考：《實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志》2017年06期

【摘要】：目的:構(gòu)建一種抑制Snail基因表達(dá)的腺相關(guān)病毒載體系統(tǒng)。方法:在GenBank中獲取Snail基因的核苷酸序列,設(shè)計(jì)并合成2條Snail基因的shRNA,應(yīng)用分子生物學(xué)方法將腺相關(guān)病毒(AAV)載體與shRNA(TUD)相結(jié)合,構(gòu)建p AAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP表達(dá)質(zhì)粒和p AAV-RC及p AAV-Helper質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至AVV-293細(xì)胞中,包裝生成攜帶sh Snail-TUD的重組腺相關(guān)病毒r AAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP。將重組病毒感染至口腔鱗癌細(xì)胞Tca8113和Cal-27中,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)sh Snail對(duì)細(xì)胞內(nèi)Snail基因的沉默效果,并測(cè)定病毒感染滴度。結(jié)果:DNA測(cè)序證明構(gòu)建的shRNA-Snail基因沉默子序列正確并成功克隆到腺病毒表達(dá)載體上;AAV-293細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白提示共轉(zhuǎn)染成功。感染口腔鱗癌細(xì)胞Tca8113和Cal-27細(xì)胞后,能顯著下調(diào)口腔鱗癌細(xì)胞Tca8113和Cal-27細(xì)胞內(nèi)的Snail mRNA和蛋白的表達(dá)水平。重組AAV感染滴度為4.4×1010/ml。結(jié)論:包裝的重組腺相關(guān)病毒r AAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP可抑制細(xì)胞Snail基因表達(dá)。
[Abstract]:Aim: to construct an adeno-associated virus vector system that inhibits Snail gene expression. Methods: the nucleotide sequence of Snail gene was obtained from GenBank, and two shRNAs of Snail gene were designed and synthesized. The adeno-associated virus (AAVV) vector was combined with shRNA-TUD by molecular biology. The pAAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP expression plasmid and the pAAV-RC and pAAV-Helper plasmids were co-transfected into AVV-293 cells, and the recombinant adeno-associated virus r AAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFPwas generated by pAAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP. The recombinant virus was infected into oral squamous cell carcinoma Tca8113 and Cal-27. The silencing effect of sh Snail on Snail gene was detected by real-time quantitative PCR, and the titer of virus infection was measured. Results the sequence of shRNA-Snail gene silencer was correct and cloned into adenovirus expression vector. The expression of green fluorescent protein in AAV-293 cells indicated that the gene was cotransfected successfully. The expression of Snail mRNA and protein in oral squamous carcinoma Tca8113 and Cal-27 cells was significantly decreased after infection with Tca8113 and Cal-27 cells. The titer of recombinant AAV infection was 4.4 脳 10 ~ (10) / ml. Conclusion: recombinant adeno-associated virus rAAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP can inhibit Snail gene expression.
【作者單位】： 海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院;
【基金】：海南省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):ZDYF2016113)
【分類(lèi)號(hào)】：R739.8

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本文編號(hào)：2024526