本文選題：乳牙牙髓干細(xì)胞 + 細(xì)胞聚合體��； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：牙齒全脫位后實(shí)施延遲再植術(shù)預(yù)后極差,通常情況下,牙髓組織壞死,牙周組織被吸收,牙齒發(fā)生根骨粘連。再生醫(yī)學(xué)近年來逐漸興起,科學(xué)家們已通過組織工程的方法在動物模型上分別成功再生出牙髓組織與牙周組織。然而對于完全脫位牙,如何實(shí)現(xiàn)牙髓與牙周組織的同時(shí)再生與重建尚未見研究及報(bào)道。乳牙牙髓干細(xì)胞(SHED)是一種幼稚的間充質(zhì)干細(xì)胞,具有良好的增殖能力與多向分化潛能,是牙齒組織再生優(yōu)良的種子細(xì)胞。前期實(shí)驗(yàn)中,我們在裸鼠移植實(shí)驗(yàn)及小型豬牙髓壞死模型上,利用SHED聚合體已經(jīng)獲得了與生理牙髓組織結(jié)構(gòu)相似的再生牙髓組織。目前牙周組織再生多用PDLSC作為種子細(xì)胞,有研究顯示在再植牙動物模型上,利用PDLSC膜片包裹牙根表面后再植可以實(shí)現(xiàn)牙周組織的再生。而SHED具有比PDLSC更強(qiáng)大的分化潛能,在特定微環(huán)境誘導(dǎo)下可以分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、神經(jīng)元樣細(xì)胞、肝細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞,但目前尚未見SHED用于牙周組織再生的報(bào)道。本研究擬通過乳牙牙髓干細(xì)胞及其聚合體的生物學(xué)性能檢測和動物模型實(shí)驗(yàn)明確其用于牙髓-牙周組織聯(lián)合再生的可行性,進(jìn)而開展臨床前瞻性試驗(yàn),探討乳牙牙髓間充質(zhì)細(xì)胞聚合體應(yīng)用于年輕恒牙全脫位后延遲再植的效果,以期為兒童牙體牙髓疾病治療提供新的治療理念和策略,并為SHED的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。第一部分乳牙牙髓干細(xì)胞及其聚合體生物學(xué)性能的實(shí)驗(yàn)研究目的:檢測人類乳牙牙髓干細(xì)胞及其聚合體的生物學(xué)性能。方法:分離并培養(yǎng)shed,檢測其分子表面標(biāo)記、克隆形成能力、增殖能力、成骨與成脂分化能力;制作shed聚合體,通過he、masson染色檢測其生物學(xué)性能。結(jié)果:shed陽性表達(dá)間充質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)志stro-1、cd90、cd105、cd146,而陰性表達(dá)造血系來源標(biāo)志物cd34、cd45。shed有較強(qiáng)的克隆形成能力、增殖能力、成骨與成脂分化能力。制備的shed聚合體he染色顯示含有較多的未分化細(xì)胞以及豐富的細(xì)胞外基質(zhì);masson染色可見交聯(lián)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的膠原纖維。結(jié)論:shed及其聚合體具有良好的生物學(xué)性能,是牙齒組織再生理想的種子細(xì)胞。第二部分自體乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體用于牙髓牙周聯(lián)合再生的動物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?首次將自體乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體應(yīng)用于比格犬全脫位牙再植治療,探討牙髓牙周組織聯(lián)合再生的可行性。方法:分離并培養(yǎng)比格犬乳牙牙髓干細(xì)胞,制作細(xì)胞聚合體;建立比格犬牙全脫位模型,設(shè)置實(shí)驗(yàn)組即再生組、陰性對照即常規(guī)處理組;再生組將自體乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體植入脫位牙根管內(nèi)并包裹牙根表面,常規(guī)處理組進(jìn)行常規(guī)牙根表面處理后根管充填氫氧化鈣制劑,然后將兩組牙齒再植固定1個(gè)月;6個(gè)月后取材,進(jìn)行micro-ct掃描,最后脫礦完成后進(jìn)行組織學(xué)檢查。結(jié)果:micro-ct掃描結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組根管壁、牙根表面光滑無吸收,牙周膜腔與硬骨板清晰;對照組根管內(nèi)顯示大量的高密度鈣化影像,牙根與牙槽骨分界不清,部分區(qū)域出現(xiàn)替代性吸收和炎性吸收,根端有不規(guī)則鈣化物。he染色結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組根管內(nèi)壁成牙本質(zhì)細(xì)胞排列整齊,毛細(xì)血管分布均勻,牙骨質(zhì)表面含有牙骨質(zhì)細(xì)胞,牙根表面膠原纖維均勻排列;對照組牙根表面可見炎性組織、陷窩以及替代性吸收,根尖端出現(xiàn)鈣化結(jié)節(jié)與炎性肉芽組織混雜結(jié)構(gòu)。結(jié)論:自體乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體可以在動物模型上實(shí)現(xiàn)牙髓與牙周組織的重建,再生的組織具有正常的組織學(xué)形態(tài),其中包含牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體、新生細(xì)胞性牙骨質(zhì)和牙周膠原纖維束等結(jié)構(gòu)。第三部分乳牙牙髓間充質(zhì)細(xì)胞聚合體用于全脫位年輕恒牙延遲再植的初步臨床試驗(yàn)?zāi)康?首次將SHED聚合體應(yīng)用于臨床年輕恒牙全脫位后延遲再植的病例,探討其牙髓牙周聯(lián)合再生的效果。方法:按照納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)選擇合適的病例,初診時(shí),兩組病例均常規(guī)清理患牙牙根并向根管內(nèi)充填氫氧化鈣制劑,然后復(fù)位固定。實(shí)驗(yàn)組取患兒乳牙牙髓,分離并培養(yǎng)SHED,制作細(xì)胞聚合體;對照組患兒不做該項(xiàng)處理。1月后患兒復(fù)診,取出實(shí)驗(yàn)組患牙,清理根管,將SHED聚合體植入根管內(nèi)并包裹牙根表面,再植固定;對照組患兒不做該項(xiàng)處理。術(shù)后1年內(nèi)定期復(fù)查,分別拍攝口內(nèi)照片、X線片、CBCT,并進(jìn)行多普勒血流檢測、牙髓電活力測試、牙周檢查等。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組臨床檢查牙冠顏色微黃透明,有光澤,多普勒血流測試結(jié)果、牙髓電活力測試結(jié)果、齦袋深度、松動度均與正常牙齒無明顯差異,患牙與鄰牙高度相近;影像學(xué)結(jié)果顯示根管壁增厚,牙周膜腔與硬骨板清晰。對照組牙齒呈灰黃色,無光澤,多普勒血流測試結(jié)果為陰性,牙髓電活力測試結(jié)果為陰性,松動度逐漸喪失,齦袋深度與正常牙齒相同,牙齒逐漸低于合平面;影像學(xué)結(jié)果顯示根管內(nèi)高密度影像,牙根可見根骨粘連。結(jié)論:SHED聚合體應(yīng)用于臨床脫位牙延遲再植可以重建患牙的形態(tài)結(jié)構(gòu)并恢復(fù)其生理功能。
[Abstract]:In order to provide a new therapeutic concept and strategy for the treatment of dental pulp diseases of children , we have found that it is a kind of immature mesenchymal stem cell which can be differentiated into osteoblasts , fat cells , chondrocytes , neuron - like cells , hepatocytes and odontoblasts . Objective : To study the feasibility of combined regeneration of dental pulp and dental pulp . The results showed that there was no absorption of dental pulp and periodontal tissue in the root canal of the experimental group . Results : The results showed that the color of tooth crown in the experimental group was yellowish and transparent , and there was no significant difference between the teeth and the adjacent teeth . The results showed that the results of the test of dental pulp were similar to those of normal teeth . The results of imaging showed that the root canal wall was thickened , the periodontal ligament cavity and the hard bone plate were clear . The results showed that the tooth shape was gradually lost , the depth of the gingival pocket was the same as that of the normal tooth , and the tooth root was gradually lower than the occlusal plane . Conclusion : The SHED polymer can reconstruct the morphology of the affected tooth and restore its physiological function .
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R782.12

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本文編號：1984418