本文選題：銀杏葉提取物 + 成骨分化　； 參考：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：一、研究背景骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis,OP)是臨床上常見的骨代謝疾病,其主要風(fēng)險(xiǎn)是骨脆性增加,骨強(qiáng)度降低,骨折危險(xiǎn)度升高。目前,骨質(zhì)疏松的發(fā)病率日漸升高,嚴(yán)重影響中老年人的生活質(zhì)量。骨質(zhì)疏松發(fā)生于頜骨時(shí)可使頜骨骨密度及生物力學(xué)性能降低,常造成剩余牙槽嵴吸收加速,導(dǎo)致牙槽骨高度及寬度減小,從而影響義齒的修復(fù)。因此有效的防治骨質(zhì)疏松,減緩牙槽骨的吸收是保證后期口腔種植、可摘局部義齒或者全口義齒修復(fù)的順利進(jìn)行和美學(xué)效果實(shí)現(xiàn)的關(guān)鍵。銀杏葉是一種植物性雌激素,近年來研究表明其在成骨方面有促進(jìn)作用。Ritu Trivedi[1]等通過去勢(shì)法誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松大鼠模型,將銀杏葉提取物作用于該大鼠模型后進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn),證明銀杏葉提取物能增加骨密度,同時(shí)提高成骨細(xì)胞的功能活性。Wu Z[2]等通過將銀杏葉提取物作用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞證明銀杏葉提取物可以促進(jìn)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化并抑制其向成脂細(xì)胞分化,從細(xì)胞水平為治療骨質(zhì)疏松提供了新的方向。銀杏葉提取物對(duì)人成骨樣細(xì)胞MG63分化的影響及其相關(guān)分子機(jī)制尚未見相關(guān)報(bào)道。經(jīng)典Wnt信號(hào)通路即Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)多種組織器官的發(fā)生、維持等多種生物學(xué)過程發(fā)揮重要作用[4,5],且其對(duì)骨代謝的調(diào)控作用已被廣泛認(rèn)識(shí)并研究,激活該通路可以促進(jìn)骨生成,而抑制該通路則會(huì)使骨量減少[6]。本實(shí)驗(yàn)將觀察銀杏葉提取物對(duì)成骨細(xì)胞分化的影響及該過程中經(jīng)典Wnt信號(hào)通路相關(guān)因子的表達(dá)變化,為銀杏葉提取物用于防治骨質(zhì)疏松提供一定的理論依據(jù)。二、研究目的探討銀杏葉提取物對(duì)人成骨樣細(xì)胞MG63分化的影響及其可能的相關(guān)分子機(jī)制。三、研究?jī)?nèi)容1、MG63細(xì)胞的培養(yǎng)人成骨樣細(xì)胞MG63培養(yǎng)于完全培養(yǎng)基(含10%Gibco胎牛血清,100IU/m L雙抗,DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基),置37℃,5%CO2孵育箱中常規(guī)培養(yǎng),每1-2天換一次液,待細(xì)胞長至鋪滿皿底80%后用0.25%胰酶(含0.02%EDTA)消化傳代。2、檢測(cè)銀杏葉提取物對(duì)成骨細(xì)胞分化的影響將不同濃度的銀杏葉提取物作用于MG63細(xì)胞,分別于培養(yǎng)第4天和第7天進(jìn)行堿性磷酸酶(ALP)活性檢測(cè),第14天時(shí)進(jìn)行茜素紅染色;于第7天時(shí)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR(q RT-PCR)檢測(cè)骨鈣素(OC)、Runx2及一型膠原蛋白A1(COL1A1)的m RNA表達(dá)情況。3、檢測(cè)銀杏葉提取物能否通過上調(diào)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路促進(jìn)成骨分化將75μg/m L的銀杏葉提取物作用于MG63細(xì)胞,抑制組加入經(jīng)典Wnt信號(hào)通路抑制劑DKK1,分別于培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行ALP活性檢測(cè),14天時(shí)進(jìn)行茜素紅染色;誘導(dǎo)7天時(shí)進(jìn)行q RT-PCR檢測(cè)OC、Runx2、COL1A1、β-catenin及細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)的m RNA表達(dá),Western Blot進(jìn)行檢測(cè)細(xì)胞核蛋白β-catenin和細(xì)胞總蛋白β-catenin、cyclin D1的表達(dá)變化情況。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、將不同濃度的銀杏葉提取物作用于細(xì)胞4天、7天時(shí)分別進(jìn)行ALP活性檢測(cè),14天時(shí)進(jìn)行茜素紅染色,發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間推移各組ALP活性均增加,濃度為50、75、100、150μg/m L的銀杏葉提取物均能提高ALP活性及鈣結(jié)節(jié)數(shù)量,并均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且在濃度為75μg/m L時(shí)最為顯著。2、在培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行q RT-PCR及Western Blot檢測(cè),與對(duì)照組相比,當(dāng)加入75μg/m L銀杏葉提取物時(shí),β-catenin、cyclin D1 m RNA及蛋白表達(dá)水平、核內(nèi)β-catenin蛋白水平均明顯升高,同時(shí)OC、Runx2、COL1A1m RNA水平也升高;當(dāng)同時(shí)加入75μg/m L銀杏葉提取物和DKK1時(shí),OC、Runx2、COL1A1、β-catenin、cyclin D1 m RNA表達(dá)水平及β-catenin、cyclin D1、核內(nèi)β-catenin蛋白表達(dá)水平明顯低于單純銀杏葉提取物組,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)論銀杏葉提取物對(duì)人成骨樣細(xì)胞MG63的成骨分化具有積極意義,且75μg/m L是最適濃度,其機(jī)制可能與經(jīng)典Wnt通路的激活有關(guān)。
[Abstract]:The research background osteoporosis ( OP ) is a common bone metabolism disease in clinic . The main risk is increased bone fragility , decreased bone strength , and increased risk of fracture . The effect of Ginkgo biloba extract on bone mineral density and bone metabolism has not been reported . The effect of Ginkgo biloba extract on the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells has not been reported . The classical Wnt signaling pathway , Wnt / 尾 - catenin signaling pathway , has been widely recognized and studied . The effect of Ginkgo biloba extract on the differentiation of bone - like cells MG63 and its possible molecular mechanism were studied . The levels of 尾 - catenin , cyclin D1 m RNA and protein were significantly increased when 75 渭g / ml Ginkgo biloba extract was added . At the same time , the levels of OC , Runx2 , COL1A1 , 尾 - catenin , cyclin D1 , and COL1A1m were significantly lower .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R781

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本文編號(hào)：1761970