光滑純鈦片表面抗菌短肽涂層的組裝、性能和生物學(xué)評(píng)價(jià)
本文選題:抗菌短肽 + 種植體周圍炎癥 ; 參考:《浙江大學(xué)》2015年博士論文
【摘要】:隨著口腔種植技術(shù)的發(fā)展,種植修復(fù)已逐漸成為牙缺失患者的首選治療方案,但引起種植手術(shù)早期失敗的因素很多,種植體頸部周圍炎癥是主要原因之一。本研究旨在應(yīng)用層層自組裝技術(shù)在光滑純鈦表面組裝上抗菌短肽涂層,并對(duì)改性后的表面進(jìn)行表征以及對(duì)體外細(xì)胞學(xué)和細(xì)菌學(xué)等的效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 鑒于濫用抗生素可能會(huì)引起多種耐藥菌株的突變,傳統(tǒng)抗菌藥物并不能作為首選。在本研究中,選擇一種具有廣譜抗菌能力的陽離子抗菌短肽Tet13(KRWWKWWRRC),通過sulfo-SMPB與四型膠原相接枝,并重命名為AMPCol。將光滑純鈦片先浸沒于帶有正電荷的殼聚糖溶液中(5mg/ml, PH=2.8)20分鐘,使表面均勻的帶上一層正電荷;接著以帶有負(fù)電荷的透明質(zhì)酸鈉溶液(0.5mg/ml, PH=7.2)和帶有正電荷的AMPCol溶液(lmg/ml)為電解質(zhì),通過層層自組裝技術(shù)將兩者均勻的組裝到鈦片表面。X射線光電子能譜儀分析發(fā)現(xiàn)在組裝有涂層的鈦片表面可以檢測(cè)到Ti,O,N和S元素,并且隨著涂層組裝數(shù)的增加,其表面氮元素含量隨之增高,而鈦元素含量隨之降低。原子力顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)鈦片表面覆蓋有顆粒狀和島狀結(jié)構(gòu)的涂層。接觸角實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明涂層表面的可濕潤(rùn)性隨著AMPCol組裝層數(shù)的變化而呈現(xiàn)有規(guī)律的改變,接觸角值在34°-40°之間。石英電子微天平可檢測(cè)換算得到鈦片表面涂層的厚度,與組裝層數(shù)具有密切相關(guān)性。通過檢測(cè)色氨酸所帶有的激發(fā)波長(zhǎng),可測(cè)定組裝有不同層數(shù)的涂層的藥物緩釋情況,發(fā)現(xiàn)本涂層可持續(xù)釋放AMPCol長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。 選擇種植體周圍炎癥的兩種主要致病菌,革蘭氏陽性的需氧菌(金黃色葡萄球菌)與革蘭氏陰性的厭氧菌(牙齦卟啉單胞菌),通過持續(xù)抑菌實(shí)驗(yàn)和早期抑制細(xì)菌生物膜的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證組裝有涂層的純鈦片的抗菌抑菌效果。結(jié)果顯示,以光滑鈦片對(duì)照組表面生長(zhǎng)的菌落數(shù)量為100%,持續(xù)浸泡帶涂層純鈦片長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月(29天)的培養(yǎng)基,可抑制99.31%的牙齦卟啉單胞菌和99.56%的金黃色葡萄球菌;組裝有7層和10層CS-(HA-AMPCol)n的純鈦片對(duì)金葡菌早期生物膜形成的抑制作用最佳。 最后,對(duì)抗菌短肽涂層材料作生物安全性檢測(cè)。通過與HaCaT細(xì)胞共培養(yǎng),檢測(cè)細(xì)胞在表面上的增殖情況,驗(yàn)證其細(xì)胞毒性。與人類血液紅細(xì)胞溫育后,測(cè)定溶血反應(yīng)情況和脂質(zhì)過氧化情況,驗(yàn)證其血液毒性。結(jié)果顯示,本研究所制備的涂層不會(huì)對(duì)HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生不良影響;也不會(huì)提高紅細(xì)胞的溶解率;對(duì)紅細(xì)胞胞膜的脂質(zhì)過氧化作用與PBS接近,即與體液相似,不會(huì)造成脂質(zhì)過氧化作用;因此本涂層具備良好的生物安全性。 本研究在光滑純鈦片表面制備了一種無細(xì)胞毒性、無血液毒性的多層次涂層,并且具有持續(xù)抗菌作用,還能抑制早期細(xì)菌生物膜的形成。本涂層可在種植體頸部局部形成一個(gè)抗菌短肽緩釋系統(tǒng),相比較于傳統(tǒng)系統(tǒng)性抗菌治療,這種治療方法具有更高的局部藥物濃度和更快的殺菌抑菌速度。本研究為非封閉式種植愈合過程中預(yù)防種植體周圍炎癥提出了一種新的更為有效的方法。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R783.6
【共引文獻(xiàn)】
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,本文編號(hào):1734735
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