本文選題：ST2細胞　切入點：P物質(zhì)　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：實驗一 P物質(zhì)對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及成骨分化的影響目的:研究不同濃度及不同時間P物質(zhì)對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞ST2細胞增殖的影響,探究P物質(zhì)對ST2成骨分化標(biāo)記物表達的影響,探討P物質(zhì)與ST2增殖及成骨分化可能存在的濃度和時間的相關(guān)性。方法:將小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(ST2)細胞株(吉滿生物科技)接種于培養(yǎng)皿(中皿)中傳代培養(yǎng),培養(yǎng)基為高糖DMEM培養(yǎng)基(含10%FBS),放置于5%C02細胞培養(yǎng)箱中37℃孵育72h傳代,傳代至3-4代時使用。加入不同濃度(濃度為1 × 10-10,1 × 10-8,1 × 10-6,1 × 10-5 mol/L)的P物質(zhì)與不加P物質(zhì)的對照組一起,培養(yǎng)3天,分別在24h,48h,72h收獲細胞,進行CCK-8檢測,比較ST2細胞的增殖活性。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)ST2細胞,分為加入1×10-6mol/L濃度的P物質(zhì)的實驗組和未加P物質(zhì)的對照組,在1,3,5,7天分別收獲細胞進行ALP免疫熒光檢測,和ALP,Col I的ELISA檢測,分析ST2細胞成骨分化過程中的蛋白表達情況。結(jié)果:CCK-8檢測顯示在24h時除1 × 10^-6mol/L及1× 10^-8mol/L濃度組外,其他組與對照組之間對ST2細胞增殖作用無統(tǒng)計學(xué)差異,48h及72h時不同濃度P物質(zhì)對ST2細胞增殖活性均有促進作用且有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),1×10^-6mol/L及1×10^-8mol/L濃度的促進作用與對照組相比有顯著差異(P0.01),其中1× 10^-6mol/L的作用效果最強;隨時間變化,增殖作用增強,且各時間組間具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。ELISA檢測分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)ALP和ColⅠ蛋白表達水平隨時間遞增,且實驗組大于對照組(P0.05)。免疫熒光染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)實驗組ALP熒光數(shù)目較對照組多。結(jié)論:P物質(zhì)能夠促進ST2細胞的增殖,其中1× 10^-6及1× 10^-8mol/L促進細胞增殖活性的作用最顯著,并且P物質(zhì)能夠在一定的條件下促進ST2的成骨分化的標(biāo)記物表達上調(diào),且具有一定的濃度和時間的相關(guān)性。實驗二 P物質(zhì)受體NK1在ST2細胞中的表達及與成骨分化的關(guān)系探討目的:觀察P物質(zhì)受體NK1在小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(ST2)中的表達,及其與成骨分化各標(biāo)記物的關(guān)系探討。方法:小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(ST2)細胞株(吉滿生物科技)接種于培養(yǎng)皿(中皿)中傳代培養(yǎng),培養(yǎng)基為高糖DMEM培養(yǎng)基(含10%FBS),放置于5%CO2細胞培養(yǎng)箱中37℃孵育72h傳代,傳代至3-4代時使用。加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液培養(yǎng)7天,分別在第1,3,5,7天收獲細胞進行NK1受體的免疫細胞化學(xué)染色,測量其光密度值。同一批細胞在1,3,5,7天收獲細胞培養(yǎng)液進行ALP、OCN(骨鈣素)的ELISA檢測,分析其表達量的變化。結(jié)果:細胞免疫化學(xué)顯示在第1天時NK1受體即開始表達,第3,5天表達上升,一周時NK1受體明顯表達,其存在于細胞膜和細胞質(zhì),主要存在于細胞質(zhì)中,成骨分化標(biāo)記物中成骨分化早期標(biāo)記物ALP隨著時間推移ELISA結(jié)果顯示表達量逐漸增加,成骨分化晚期標(biāo)記物OCN在1,3,5天表達量很少,第7天開始有明顯增加表達。結(jié)論:NK1受體在ST2細胞成骨分化的早期即開始出現(xiàn),并且與促進ST2成骨分化成熟密切相關(guān)。
[Abstract]:Effect of substance P on the proliferation and osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in mice objective: to study the effects of substance P at different concentrations and time on the proliferation of ST2 cells from mouse bone marrow mesenchymal stem cells. To investigate the effect of substance P on the expression of osteogenic differentiation markers of ST2. To explore the relationship between substance P and the possible concentration and time of ST2 proliferation and osteogenic differentiation. Methods: mouse bone marrow mesenchymal stem cell line ST2 was cultured in culture culture dish (medium dish). High sugar DMEM medium (containing 10s) was incubated at 37 鈩，

本文編號：1667848