本文選題：ST2細(xì)胞　切入點(diǎn)：P物質(zhì)　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：實(shí)驗(yàn)一 P物質(zhì)對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響目的:研究不同濃度及不同時(shí)間P物質(zhì)對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞ST2細(xì)胞增殖的影響,探究P物質(zhì)對(duì)ST2成骨分化標(biāo)記物表達(dá)的影響,探討P物質(zhì)與ST2增殖及成骨分化可能存在的濃度和時(shí)間的相關(guān)性。方法:將小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(ST2)細(xì)胞株(吉滿生物科技)接種于培養(yǎng)皿(中皿)中傳代培養(yǎng),培養(yǎng)基為高糖DMEM培養(yǎng)基(含10%FBS),放置于5%C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育72h傳代,傳代至3-4代時(shí)使用。加入不同濃度(濃度為1 × 10-10,1 × 10-8,1 × 10-6,1 × 10-5 mol/L)的P物質(zhì)與不加P物質(zhì)的對(duì)照組一起,培養(yǎng)3天,分別在24h,48h,72h收獲細(xì)胞,進(jìn)行CCK-8檢測(cè),比較ST2細(xì)胞的增殖活性。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)ST2細(xì)胞,分為加入1×10-6mol/L濃度的P物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)組和未加P物質(zhì)的對(duì)照組,在1,3,5,7天分別收獲細(xì)胞進(jìn)行ALP免疫熒光檢測(cè),和ALP,Col I的ELISA檢測(cè),分析ST2細(xì)胞成骨分化過(guò)程中的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:CCK-8檢測(cè)顯示在24h時(shí)除1 × 10^-6mol/L及1× 10^-8mol/L濃度組外,其他組與對(duì)照組之間對(duì)ST2細(xì)胞增殖作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,48h及72h時(shí)不同濃度P物質(zhì)對(duì)ST2細(xì)胞增殖活性均有促進(jìn)作用且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),1×10^-6mol/L及1×10^-8mol/L濃度的促進(jìn)作用與對(duì)照組相比有顯著差異(P0.01),其中1× 10^-6mol/L的作用效果最強(qiáng);隨時(shí)間變化,增殖作用增強(qiáng),且各時(shí)間組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。ELISA檢測(cè)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)ALP和ColⅠ蛋白表達(dá)水平隨時(shí)間遞增,且實(shí)驗(yàn)組大于對(duì)照組(P0.05)。免疫熒光染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組ALP熒光數(shù)目較對(duì)照組多。結(jié)論:P物質(zhì)能夠促進(jìn)ST2細(xì)胞的增殖,其中1× 10^-6及1× 10^-8mol/L促進(jìn)細(xì)胞增殖活性的作用最顯著,并且P物質(zhì)能夠在一定的條件下促進(jìn)ST2的成骨分化的標(biāo)記物表達(dá)上調(diào),且具有一定的濃度和時(shí)間的相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)二 P物質(zhì)受體NK1在ST2細(xì)胞中的表達(dá)及與成骨分化的關(guān)系探討目的:觀察P物質(zhì)受體NK1在小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(ST2)中的表達(dá),及其與成骨分化各標(biāo)記物的關(guān)系探討。方法:小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(ST2)細(xì)胞株(吉滿生物科技)接種于培養(yǎng)皿(中皿)中傳代培養(yǎng),培養(yǎng)基為高糖DMEM培養(yǎng)基(含10%FBS),放置于5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育72h傳代,傳代至3-4代時(shí)使用。加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液培養(yǎng)7天,分別在第1,3,5,7天收獲細(xì)胞進(jìn)行NK1受體的免疫細(xì)胞化學(xué)染色,測(cè)量其光密度值。同一批細(xì)胞在1,3,5,7天收獲細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行ALP、OCN(骨鈣素)的ELISA檢測(cè),分析其表達(dá)量的變化。結(jié)果:細(xì)胞免疫化學(xué)顯示在第1天時(shí)NK1受體即開始表達(dá),第3,5天表達(dá)上升,一周時(shí)NK1受體明顯表達(dá),其存在于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì),主要存在于細(xì)胞質(zhì)中,成骨分化標(biāo)記物中成骨分化早期標(biāo)記物ALP隨著時(shí)間推移ELISA結(jié)果顯示表達(dá)量逐漸增加,成骨分化晚期標(biāo)記物OCN在1,3,5天表達(dá)量很少,第7天開始有明顯增加表達(dá)。結(jié)論:NK1受體在ST2細(xì)胞成骨分化的早期即開始出現(xiàn),并且與促進(jìn)ST2成骨分化成熟密切相關(guān)。
[Abstract]:Effect of substance P on the proliferation and osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in mice objective: to study the effects of substance P at different concentrations and time on the proliferation of ST2 cells from mouse bone marrow mesenchymal stem cells. To investigate the effect of substance P on the expression of osteogenic differentiation markers of ST2. To explore the relationship between substance P and the possible concentration and time of ST2 proliferation and osteogenic differentiation. Methods: mouse bone marrow mesenchymal stem cell line ST2 was cultured in culture culture dish (medium dish). High sugar DMEM medium (containing 10s) was incubated at 37 鈩，

本文編號(hào)：1667848