本文選題：慢性牙周炎　切入點：單核細胞　出處：《錦州醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的探究單核細胞上Toll樣受體4(Toll-like Receptor 4,TLR4)與人慢性牙周炎(Chronic Periodontitis,CP)發(fā)病的關(guān)系。方法于遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院,隨機選取被診斷為CP的患者15例,牙周健康者(Healthy Control,HC)10例,取其外周血,應(yīng)用流式細胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)檢測CD14+單核細胞上TLR4及Interleukin(IL)-6的表達變化;酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測血漿中IL-6的水平變化。初步探究單核細胞上TLR4在CP發(fā)病機制中的作用。細胞實驗進一步驗證外周血實驗結(jié)果,即:培養(yǎng)THP-1細胞后,分別給予0.9%氯化鈉注射液(NS)、脂多糖(LPS)、TLR4特異性阻斷劑(Anti-TLR4)及Anti-TLR4+LPS處理,6h后,分別采用FCM、實時熒光定量PCR檢測TLR4的表達,用ELISA技術(shù)檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-6的水平變化。比較NS、LPS及Anti-TLR4組TLR4及IL-6的表達變化,以驗證外周血實驗結(jié)果;比較Anti-TLR4與Anti-TLR4+LPS組TLR4和IL-6的表達變化,探究TLR4介導(dǎo)的信號通路是否可以成為CP的治療靶點。結(jié)果1.CP組外周血單核細胞上TLR4與IL-6的平均熒光強度均高于HC組(P0.001)。2.CP組血漿中IL-6的水平亦高于HC組(P0.001)。3.CP患者單核細胞內(nèi)IL-6的表達與TLR4的表達呈正相關(guān)(P0.01),血漿中IL-6的水平與單核細胞內(nèi)IL-6的表達亦呈正相關(guān)(P0.01)。4.LPS組THP-1細胞上TLR4的在蛋白與m RNA水平的表達及細胞上清中IL-6的水平均高于NS組(P=0.019,P0.001,P0.001);特異性阻斷TLR4后,與LPS組相比,TLR4的表達及細胞上清中IL-6的水平均降低(P0.001)。5.Anti-TLR4與Anti-TLR4+LPS兩組細胞上TLR4的表達和細胞上清中IL-6的水平無差異。結(jié)論G-來源的LPS可引起單核細胞上TLR4的表達升高,并通過TLR4而激活單核細胞,使IL-6等致炎因子水平上調(diào),參與慢性牙周炎的病理形成。TLR4識別LPS信號通路可成為慢性牙周炎的治療靶點。
[Abstract]:Objective to investigate the relationship between 4(Toll-like Receptor 4 (TLR4) and chronic periodontitis in human chronic periodontitis. Methods 15 patients with CP and 10 patients with periodontal health were randomly selected from the second affiliated Hospital of Liaoning Medical College. Flow Cytometry (FCM) was used to detect the expression of TLR4 and Interleukin(IL)-6 in CD14 monocytes. Enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) was used to detect the level of IL-6 in plasma. The role of TLR4 on monocytes in the pathogenesis of CP was preliminarily explored. After being treated with 0.9% sodium chloride injection (NSN), lipopolysaccharide (LPSS-TLR4) specific blocker (Anti-TLR4) and Anti-TLR4 LPS for 6 h, the expression of TLR4 was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. ELISA technique was used to detect the level of IL-6 in the supernatant of cell culture, to compare the expression of TLR4 and IL-6 in NSN LPS group and Anti-TLR4 group in order to verify the results of peripheral blood experiment, to compare the changes of TLR4 and IL-6 expression between Anti-TLR4 group and Anti-TLR4 LPS group, and to compare the expression of TLR4 and IL-6 between Anti-TLR4 group and Anti-TLR4 LPS group. Results the average fluorescence intensity of TLR4 and IL-6 in peripheral blood monocytes in 1.CP group was higher than that in HC group P0.001n.2.2. the level of IL-6 in plasma of 1.CP group was higher than that of HC group P0.001n.3.3. The expression of IL-6 was positively correlated with the expression of TLR4, and the level of IL-6 in plasma was positively correlated with the expression of IL-6 in monocytes. 4. The expression of TLR4 in THP-1 cells and the level of IL-6 in the supernatant of THP-1 cells were higher than those in LPS-treated THP-1 cells. In NS group, P0. 019, P0. 001, P0. 001, and after blocking TLR4, Compared with the LPS group, the expression of TLR4 and the level of IL-6 in the supernatant of TLR4 were significantly lower than those in the Anti-TLR4 LPS group. 5. The expression of TLR4 and the level of IL-6 in the supernatant of the two groups were not significantly different from those in the Anti-TLR4 LPS group. Conclusion G- derived LPS can induce the increase of TLR4 expression in monocytes. Monocytes were activated by TLR4, and the level of IL-6 and other inflammatory factors were up-regulated. TLR4 was involved in the pathogenesis of chronic periodontitis. TLR4 recognition of LPS signal pathway could become the therapeutic target of chronic periodontitis.
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R781.4

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本文編號：1661838