本文選題：雙硫侖　切入點：上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化　出處：《吉林大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究目的:口腔癌是世界第六位最常見的癌癥,它的轉(zhuǎn)移、復發(fā)以及化療耐受是導致腫瘤治療失敗和患者死亡的主要原因。然而針對以上問題仍缺乏有效的治療手段。上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在腫瘤的轉(zhuǎn)移、復發(fā)中起重要作用。而轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是進行EMT相關研究的主要誘導劑。雙硫侖(disulfiram,DSF)是一種有效治療酗酒的藥物。近年來,人們發(fā)現(xiàn)DSF具有促進腫瘤細胞凋亡、抑制侵襲轉(zhuǎn)移并逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥的特征。本實驗利用TGF-β誘導口腔癌細胞株KB發(fā)生EMT,探究DSF是否能逆轉(zhuǎn)這一過程,進而達到抑制口腔癌侵襲遷移并逆轉(zhuǎn)耐藥的效果。研究方法:本實驗以口腔癌細胞株(KB)及口腔癌細胞耐藥株(KBV)為研究對象。首先,采用不同濃度(1μM、5μM、10μM、20μM和40μM)DSF及10 ng/ml TGF-β對細胞預處理24 h。通過MTT法檢測細胞增殖能力;通過細胞克隆形成實驗測定細胞克隆形成能力和增殖能力;通過Annexin V/PI雙染色法檢測細胞的凋亡和壞死;通過transwell實驗和細胞劃痕實驗檢測細胞的侵襲和遷移能力;通過實時定量RT-PCR方法檢測上皮和間充質(zhì)標志物(E-鈣粘蛋白、波形蛋白)、干細胞標志基因(SOX2及OCT4)的m RNA表達水平。所有實驗結果至少重復3次。統(tǒng)計學分析采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗。研究結果:1.TGF-β(10 ng/ml)能有效誘導KB由多角形變?yōu)殚L梭形,并促進其侵襲和遷移。隨著DSF濃度的增加,KB細胞的形態(tài)逐漸恢復為TGF-β誘導前的形態(tài)。DSF濃度≥5μM時,表現(xiàn)出對TGF-β誘導的KB侵襲、遷移的明顯抑制(P0.05),并呈濃度依賴性。2.TGF-β能促進KB細胞間充質(zhì)標志物(波形蛋白)的表達,降低上皮標志物(E-鈣粘蛋白)的表達。這表明TGF-β能誘導KB細胞發(fā)生EMT。DSF能顯著降低波形蛋白的表達,在高劑量時增加E-鈣粘蛋白的表達。這表明DSF能抑制TGF-β誘導的KB細胞EMT。3.當DSF濃度≥5μM時,能顯著抑制KB細胞的增殖(P0.05)。當DSF濃度≥10μM時,能顯著抑制KB細胞形成克隆的數(shù)量和直徑(P0.05)。當DSF濃度≥20μM時,能明顯促進KB細胞的凋亡(P0.05)。4.KBV細胞對腫瘤化療藥物長春新堿顯示出耐受性。當聯(lián)合5μMDSF時,KBV細胞對長春新堿的耐受性降低。5.DSF能有效降低KB細胞干細胞標志基因SOX2和OCT4的m RNA表達水平(P0.05)。研究結論:DSF不僅能在體外抑制TGF-β誘導的EMT,抑制口腔癌細胞的侵襲和遷移,還能體外抑制腫瘤細胞的增殖、克隆形成,促進凋亡。此外,DSF能降低口腔癌耐藥株的耐藥性,并降低口腔癌細胞的干性。
[Abstract]:Objective: oral cancer is the sixth most common cancer and its metastasis, recurrence and chemoresistance is a major cause of treatment failure and death of the tumor patients. However, in view of the above problems is the lack of effective therapy. Epithelial mesenchymal transition (epithelial-mesenchymal transition, EMT) in tumor metastasis, play an important the role of recurrence and transforming growth factor beta (transforming beta growth factor-, TGF- beta) is the main inducer of EMT related research. Disulfiram (disulfiram, DSF) is an effective treatment for alcoholism drugs. In recent years, it is found that DSF can promote tumor cell apoptosis, inhibit the invasion and metastasis characteristics reversal of drug resistance of tumor cells. This experiment using TGF- beta induced oral cancer cell line KB EMT, to explore whether DSF can reverse the process, and then to inhibit oral cancer invasion and the effect of reversing drug resistance Research methods: in this experiment, oral cancer cell line (KB) and oral cancer cells resistant strains (KBV) as the research object. Firstly, with different concentrations (1 M, 5 M, 10 M, 20 M and 40 M) and 10 DSF ng/ml TGF- 24 beta on cell pretreatment the H. cell proliferation was evaluated by MTT assay; the cell clone experimental determination of cell colony formation and proliferation ability formation; through apoptosis and necrosis of Annexin cells was determined by V/PI double staining method; the invasion and migration of Transwell experiment and cell scratch assay; through quantitative real-time RT-PCR method for detection of epithelial and mesenchymal markers (E-, E-cadherin, vimentin), stem cell marker genes (SOX2 and OCT4) the expression level of M RNA. All experiments were repeated at least 3 times for statistical analysis. T test using SPSS17.0 statistical software. Results: 1.TGF- beta (10 ng/ml) can effectively induce KB from polygonal. To fusiform and promote its invasion and migration. With the increase of DSF concentration, the morphology of KB cells gradually restored to form the.DSF concentration is induced by TGF- before 5 M, showed the invasion of KB induced by TGF- beta, inhibit migration (P0.05), and.2.TGF- in a concentration dependent manner. Beta cells can promote KB mesenchymal markers (vimentin) expression, reduced epithelial marker (E- cadherin) expression. This indicates that TGF- beta induced EMT.DSF significantly reduced the expression of vimentin in KB cells, increase the expression of E- cadherin in high dose. This indicates that KB EMT.3. DSF can inhibit TGF- beta cells induced when the DSF concentration is 5 M, can significantly inhibit the proliferation of KB cells (P0.05). When the DSF concentration is 10 M, can significantly inhibit the formation of KB cells. The diameter and number of clones (P0.05). When the DSF concentration is 20 M, can significantly promote the apoptosis of KB cells (P0.05.4.KBV cell) Of chemotherapy vincristine showed tolerance. When combined with 5 MDSF, the tolerance of KBV cells to vincristine decreased.5.DSF can effectively reduce the KB cell stem cell marker M RNA gene SOX2 and OCT4 expression level (P0.05). Conclusion: DSF can inhibit TGF- induced EMT in vitro, inhibition of invasion the migration and oral cancer cells, inhibit the proliferation of tumor cells, but also in vitro clone formation, promote apoptosis. Moreover, DSF can reduce the drug resistant strains of oral cancer, oral cancer cells and reduce the dry.

【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.8

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張杰,張建國,趙福運;多藥耐藥基因在口腔癌組織中的表達與分析研究[J];華西口腔醫(yī)學雜志;2002年02期

2 Jatin Shah;黃俊偉;周維國;黃志剛;;口腔癌[J];中國醫(yī)學文摘(耳鼻咽喉科學);2008年06期

3 楊靜;梁新華;;年輕人口腔癌的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2008年06期

4 鄭家偉;鐘來平;張志愿;;口腔癌的預防[J];中國口腔頜面外科雜志;2009年02期

5 孫玉娟;孫正;;乙醇與口腔癌臨床流行病學的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2009年02期

6 萬闊;;用好牙刷 防口腔癌[J];農(nóng)家科技;2009年04期

7 陸新萍;王代友;;口腔癌多藥耐藥的研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學綜述;2010年06期

8 宋文婷;李敏;彭驪蘇;林梅;;口腔癌和癌前病變臨床檢測的現(xiàn)狀[J];臨床口腔醫(yī)學雜志;2010年05期

9 秦偉;;口腔癌影響因素研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2010年06期

10 ;發(fā)達國家及發(fā)展中國家口腔癌發(fā)病率[J];中國口腔頜面外科雜志;2010年05期

相關會議論文 前10條

1 王麗薇;孫莉;譚寧;;人細胞色素P450 2A6基因在口腔癌中表達的研究[A];中國解剖學會第十一屆全國組織學與胚胎學青年學術研討會論文匯編[C];2009年

2 曹新穎;;口腔癌和癌前病損的研究[A];中華口腔醫(yī)學會全科口腔醫(yī)學專業(yè)委員會第一次學術年會會議論文集[C];2009年

3 賀宇彤;陳萬青;張思維;李賀;楊楊;;中國2004～2005年口腔癌死亡分析——第三次死因回顧抽樣調(diào)查資料分析[A];全國腫瘤流行病學和腫瘤病因?qū)W學術會議論文集[C];2011年

4 趙士芳;劉雁鳴;何立波;樊立潔;;口腔癌中誘導型一氧化氮合酶表達與微血管形成關系的研究[A];第一屆全國口腔頜面部腫瘤學術會議論文匯編[C];2001年

5 吳煜農(nóng);王陳飛;宋曉萌;葉金海;;口腔癌患者手術前后生存質(zhì)量狀況的初步研究[A];中華醫(yī)學會第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學術會議論文匯編（下）[C];2007年

6 孫玉娟;孫正;;飲酒與口腔癌臨床流行病學現(xiàn)況的初步研究[A];第七屆全國口腔黏膜病暨第五屆口腔中西醫(yī)結合大會論文匯編[C];2008年

7 李向春;張素欣;段玉芹;;口腔癌患者手術前后細胞免疫功能變化的檢測及臨床意義[A];第五屆全國中醫(yī)藥免疫學術研討會——暨環(huán)境·免疫與腫瘤防治綜合交叉會議論文匯編[C];2009年

8 張陳平;;口腔癌治療規(guī)范的思考[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

9 王陳飛;宋曉萌;吳煜農(nóng);;口腔癌患者手術前后生存質(zhì)量狀況的初步研究[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

10 張志華;曹新穎;;口腔癌的早期診斷和癌前病損的研究[A];中華口腔醫(yī)學會全科口腔醫(yī)學專業(yè)委員會第一次學術年會會議論文集[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 上海瑞金醫(yī)院瑞安腫瘤中心 蔡德江;劣質(zhì)假牙誘發(fā)口腔癌[N];健康時報;2008年

2 本報記者 項錚;嚼檳榔真能患口腔癌嗎？[N];科技日報;2013年

3 重慶萬州 崔鍵;可怕的口腔癌[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

4 ;男人口腔癌的警訊[N];貴州日報;2005年

5 郭成兵;細說口腔癌[N];健康報;2004年

6 健康時特約記者　 劉遠橋 鄒爭春;80%口腔癌可以預防[N];健康時報;2006年

7 黃芳;怎樣預防口腔癌[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

8 浙江省人民醫(yī)院口腔科副主任醫(yī)師 黃煒邋宋黎勝 整理;口腔癌與生活方式有關[N];健康報;2007年

9 劉橋斌;臺灣口腔癌因檳榔高發(fā)？[N];健康時報;2007年

10 李博;上海找到口腔癌治療新方案[N];科技日報;2008年

相關博士學位論文 前10條

1 蔡菁華;多能干細胞因子Oct4和Sox2對口腔癌發(fā)生發(fā)展作用的實驗研究[D];鄭州大學;2016年

2 胡永;腫瘤相關巨噬細胞促口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2016年

3 余世斌;蛋白激酶C在口腔癌形成過程中的作用和分子機制研究[D];武漢大學;2004年

4 王蓓克;基于金納米棒的多功能復合材料在口腔癌診斷與治療中的應用[D];武漢大學;2015年

5 劉華;口腔癌引流區(qū)淋巴結反應性增生與轉(zhuǎn)移關系的研究[D];四川大學;2005年

6 張素欣;不同方式負載抗原后外周血樹突狀細胞對口腔癌抑瘤作用的體內(nèi)外實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2007年

7 韓波;反義HIF-1α基因轉(zhuǎn)染提高口腔癌放療敏感性的相關基礎研究[D];四川大學;2005年

8 謝春;化療后口腔癌手術安全邊界確定的臨床及病理學研究[D];四川大學;2004年

9 陳方淳;腫瘤壞死因子α單核苷酸多態(tài)性與口腔癌發(fā)病風險的Meta分析[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

10 王麗京;Slit-Robo信號在口腔癌形成中的功能研究[D];蘭州大學;2008年

相關碩士學位論文 前10條

1 郭大魁;口腔癌與嚼食檳榔相關性研究[D];大連醫(yī)科大學;2008年

2 楊佳;口腔癌患者術前心理健康狀況的調(diào)查分析[D];重慶醫(yī)科大學;2012年

3 蔣麗娟;口腔癌VEGF誘導致耐受性DC對T細胞免疫功能的影響[D];南京大學;2016年

4 王紅媛;羅格列酮與長春新堿合用對人口腔表皮樣癌細胞的抗腫瘤作用研究[D];山東大學;2016年

5 龍小佳;HPV16E6、p53和TLR1在口腔癌中的表達研究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

6 周美玲;MT1-MMP調(diào)控MMPs表達促口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2016年

7 丁繼平;3D打印個體化口腔放療支架的研制及初步臨床評估[D];上海交通大學;2015年

8 杜聞;長株潭地區(qū)口腔癌患者血液微量元素檢測臨床相關研究[D];南華大學;2016年

9 馮雪峰;口腔癌患者就醫(yī)延遲現(xiàn)狀及其影響因素的研究[D];大連醫(yī)科大學;2016年

10 辛穎;雙硫侖抑制TGF-β誘導的口腔癌KB細胞上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化[D];吉林大學;2017年

，

本文編號：1591294