本文選題：直接PCR　切入點(diǎn)：DNA提取　出處：《哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2014年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的利用加入突變TaqDNA聚合酶等的優(yōu)化方法實(shí)現(xiàn)人類牙齒齦溝液中的細(xì)菌及人類基因組片段的直接擴(kuò)增。方法隨機(jī)選取10例牙齦炎患者。用無菌注射器分別吸取10μL的齦溝液。然后各吸取2μL,標(biāo)記為第一組,分別加入突變TaqDNA聚合酶及DMSO,通過改變PCR反應(yīng)體系,直接實(shí)現(xiàn)齦溝液中細(xì)菌的16sRNA及MAOA-VNTR基因的擴(kuò)增;再分別吸取2μL,標(biāo)記為第二組,此組先采用微量DNA提取試劑盒來實(shí)現(xiàn)DNA的提取,然后擴(kuò)增齦溝液中細(xì)菌的16sRNA及MAOA-VNTR基因。結(jié)果直接擴(kuò)增法所獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物比傳統(tǒng)提取DNA法多2個(gè),兩種方法的轉(zhuǎn)化子陽性率無差別;MAOA-VNTR可擴(kuò)增出單倍體,串聯(lián)體等。結(jié)論直接PCR法可以用于齦溝液中細(xì)菌的初步檢測以及人類基因組小片段的擴(kuò)增,也可應(yīng)用于牙齦炎或牙周炎患者的口腔齦溝液研究及臨床診斷。
[Abstract]:Objective to realize the direct amplification of bacteria and human genome fragments in human gingival crevicular fluid by adding mutated TaqDNA polymerase. Methods Ten patients with gingivitis were randomly selected and 10 渭 L were extracted with sterile syringe. Of gingival crevicular fluid. Then they drew 2 渭 L each and labeled it as the first group. By adding mutated TaqDNA polymerase and DMSOrespectively, the 16s RNA and MAOA-VNTR gene of bacteria in gingival crevicular fluid were amplified directly by changing the PCR reaction system, and then 2 渭 L was absorbed separately and labeled as the second group. In this group, the small amount of DNA extraction kit was used to extract DNA. The 16s RNA and MAOA-VNTR genes of the bacteria in gingival crevicular fluid were amplified. Results the amplification products obtained by direct amplification were 2 more than those obtained by traditional DNA extraction method. The positive rates of transformants of the two methods were not different from those of MAOA-VNTR, and haploid could be amplified by direct amplification. Conclusion the direct PCR method can be used for the preliminary detection of bacteria in gingival crevicular fluid and the amplification of human genome fragments, as well as for the study and clinical diagnosis of oral gingival crevicular fluid in patients with gingivitis or periodontitis.
【作者單位】： 蘭州市中醫(yī)醫(yī)院科教科;蘭州市口腔醫(yī)院;西北民族大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院;
【基金】：甘肅省衛(wèi)生行業(yè)科研計(jì)劃項(xiàng)目(GSWST2013-23) 甘肅省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(1204FKCA168)
【分類號】：R781.41

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本文編號：1559789