本文關(guān)鍵詞： 咬合干擾 P2X3受體 咬肌 痛覺過敏　出處：《山東大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：口頜面部是人體比較容易產(chǎn)生疼痛的部位之一,相當(dāng)一部分慢性疼痛的患者源于口頜面咀嚼肌疼痛,但是它的發(fā)病機(jī)制并未完全明確,咬合干擾是引起咀嚼肌疼痛致病因素之一。以往的研究顯示P2X3受體在口頜面疼痛的外周及中樞的傳導(dǎo)中起著重要的作用,但這些研究多集中于化學(xué)介質(zhì)或電刺激過度收縮造成的咀嚼肌疼痛,咬合干擾引起咀嚼肌疼痛的研究較少。本研究中,我們采用抬高大鼠后牙單側(cè)咬合的方法建立咬合干擾動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?了解咬合干擾建立后大鼠咀嚼肌機(jī)械痛閾的變化；并通過觀察建立咬合干擾動(dòng)物模型后P2X3受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(三叉神經(jīng)脊束核尾側(cè)亞核(Subnuclei caudalis,Vc)、中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)(midbrain periaqueductal gray, PAG)及中縫背核(dorsal raphe nucleus,DR))中的表達(dá)變化以及與大鼠咀嚼肌痛閾改變的趨勢(shì)之間的關(guān)系,研究P2X3受體在Vc、PAG和DR組織中的分布特點(diǎn)以及在咬合干擾所致的口頜面部咀嚼肌疼痛發(fā)生發(fā)展中所起的作用,以便從脊髓及脊髓上水平的中樞神經(jīng)系統(tǒng)探究口頜面疼痛的發(fā)生機(jī)制,為臨床上治療口頜面部疼痛提供新的方向和治療思路。方法：1.54只8周齡雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為6個(gè)組(每組9只),1個(gè)對(duì)照組與5個(gè)實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組大鼠建立咬合干擾動(dòng)物模型,分別為建立咬合干擾模型后1天組,3天組,7天組,14天組,28天組。采用大鼠右側(cè)下頜第一磨牙粘固3/4金屬鑄造冠(厚度為1.0 nm)的方法建立咬合干擾動(dòng)物模型。對(duì)照組大鼠麻醉后模擬同咬合干擾組相同的操作,被動(dòng)張口10分鐘,但不進(jìn)行金屬冠的粘結(jié)。2.在建立咬合干擾模型后1,3,7,14,28天以及對(duì)照組采用Von Frey尼龍纖維對(duì)大鼠雙側(cè)咬肌進(jìn)行機(jī)械疼痛分值的測(cè)量,然后分批分別取大鼠雙側(cè)Vc、PAG和DR組織對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。每組3只大鼠在全麻下甲醛灌注后取雙側(cè)Vc以及PAG和DR組織固定后包埋,切片,應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)并在400倍顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)各組織中P2X3受體免疫陽性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量；每組3只大鼠麻醉下分離切取完整雙側(cè)Vc以及PAG和DR組織,-80℃冷凍,應(yīng)用熒光定量PCR (quantitative-PCR)法檢測(cè)各組織中P2X3受體mRNA的相對(duì)表達(dá)量。每組3只大鼠麻醉下分離切取完整雙側(cè)Vc以及PAG和DR組織,-80℃冷凍,應(yīng)用Western Blot技術(shù)檢測(cè)各組織中P2X3受體蛋白的相對(duì)表達(dá)量。對(duì)所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)對(duì)照組與各時(shí)間點(diǎn)咬合干擾組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,并將各組織中P2X3受體陽性表達(dá)與咬肌疼痛分?jǐn)?shù)之間進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析(取雙側(cè)a=0.05水準(zhǔn),檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)p0.05)。結(jié)果：1.建立咬合干擾模型后,咬合干擾組大鼠雙側(cè)咬肌的疼痛閾值均明顯降低,痛覺過敏持續(xù)了整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程。咬合干擾組大鼠雙側(cè)咬肌的疼痛分值于咬合干擾模型建立后表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)：建立模型后第1天咬肌的疼痛分值開始明顯升高,第7天時(shí)達(dá)到最大值,接著疼痛分值逐漸下降,但仍高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。雖然干擾側(cè)大鼠咬肌的疼痛分值略高于非干擾側(cè),但是兩者之間未見明顯差異(p0.05)2.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：P2X3受體免疫陽性主要表達(dá)在大鼠Vc淺層、PAG外側(cè)區(qū)和DR組織中的小型神經(jīng)元細(xì)胞上(面積400μm2)。咬合干擾組大鼠雙側(cè)Vc組織中的P2X3受體陽性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量在建立咬合干擾模型后各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于對(duì)照組,而干擾側(cè)與非干擾側(cè)之間無明顯差異(p0.05)；在建立咬合干擾模型后,咬合干擾組大鼠雙側(cè)Vc組織中的P2X3受體陽性細(xì)胞數(shù)量改變表現(xiàn)出先升高后降低趨勢(shì),第一天即明顯升高,在第7天達(dá)到最大值,此后雖逐漸降低但仍明顯高于對(duì)照組(p0.05),與咬肌疼痛分值的改變趨勢(shì)一致,兩者呈正相關(guān)；而咬合干擾組大鼠PAG組織中P2X3受體陽性細(xì)胞數(shù)量也在第7天明顯升高,此時(shí)咬肌的疼痛分值最高,痛閾最低(p0.05),與咬肌疼痛分值的改變趨勢(shì)呈正相關(guān)；而咬合干擾組大鼠DR組織中P2X3受體陽性細(xì)胞數(shù)量在第3天明顯升高,第七天達(dá)到最高值,此時(shí)咬肌的疼痛分值最高,痛閾最低(p0.05),此后降低接近對(duì)照組(p0.05),與咬肌疼痛分值的改變趨勢(shì)呈正相關(guān)。3.建立咬合干擾模型后,PCR結(jié)果顯示：建立咬合干擾模型后1天,在咬合干擾組的雙側(cè)Vc組織中,P2X3受體mRNA的相對(duì)表達(dá)量即達(dá)到最高值隨后逐漸降低,3天組、7天組、14天組均明顯高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),28天組降至與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。但干擾側(cè)和非干擾側(cè)之間大鼠Vc組織內(nèi)P2X3受體mRNA的相對(duì)表達(dá)量統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異(p0.05)。在咬合干擾組大鼠的PAG和DR組織中,P2X3受體mRNA的相對(duì)表達(dá)量?jī)H在第1天時(shí)高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.建立咬合干擾模型后,Western blot結(jié)果顯示：咬合干擾組大鼠的雙側(cè)Vc組織內(nèi)P2X3受體蛋白的相對(duì)表達(dá)量從第1天開始即出現(xiàn)明顯升高(p0.05),第7天時(shí)達(dá)到最大值,之后雖略有下降,但仍高于對(duì)照組(p0.05),但是干擾側(cè)與非干擾側(cè)之間大鼠Vc組織內(nèi)P2X3受體蛋白的相對(duì)表達(dá)量無明顯差異(p0.05)；在咬合干擾組大鼠的PAG和DR組織中,P2X3受體蛋白的相對(duì)表達(dá)量?jī)H在第7天時(shí)明顯升高(p0.05)。結(jié)論：1.實(shí)驗(yàn)性咬合干擾可以直接引起咀嚼肌的痛覺過敏。2.P2X3受體免疫陽性主要表達(dá)在Vc淺層、PAG外側(cè)區(qū)和DR中的小型神經(jīng)元細(xì)胞上。3.Vc、PAG和DR組織內(nèi)的P2X3受體參與了咬合干擾所致的咀嚼肌疼痛傳導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)敏化機(jī)制和內(nèi)源性疼痛調(diào)節(jié)機(jī)制,可為臨床上治療口頜面部疼痛新的研究方向提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective : To study the distribution of P2X3 receptor in the peripheral and central nervous system of rats with oral and maxillofacial pain . Results : 1 . After establishing the occlusal interference model , the number of P2X3 receptor positive cells in the rats with occlusal interference was significantly higher than that in the control group ( p < 0.05 ) . The number of P2X3 receptor positive cells in the bilateral Vc group was higher than that of the control group ( p < 0.05 ) . Conclusion : 1 . The expression of P2X3 receptor protein is significantly higher than that in the 7th day ( p < 0.05 ) . Conclusion : 1 . The experimental occlusal interference can directly cause the pain sensitivity of the chewing muscles . The P2X3 receptor is mainly expressed in the small neuronal cells in the Vc shallow , PAG and DR . The P2X3 receptors in the PAG and DR tissues are involved in the central nervous system sensitization mechanism and the endogenous pain regulation mechanism caused by the occlusal interference , which can provide theoretical basis for the new research direction of the maxillofacial pain in clinic .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R782

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本文編號(hào)：1520860