本文關(guān)鍵詞：苯妥英鈉對LPS作用下人牙周膜成纖維細胞增殖和表達TNF-α的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《鄭州大學(xué)》 2015年

苯妥英鈉對LPS作用下人牙周膜成纖維細胞增殖和表達TNF-α的影響

余方方  

【摘要】：研究背景牙周病嚴(yán)重威脅人類健康,在我國牙周病的發(fā)病率也呈逐年增高的趨勢。牙周病是一種慢性炎癥性疾病,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是牙周病的誘因之一。苯妥英鈉(Phenytoin,PHT)是傳統(tǒng)的抗癲癇藥物,因發(fā)現(xiàn)其能引起牙齦增生(gingival overgrowth,GO),因此有關(guān)其對創(chuàng)面愈合的作用廣泛開展。苯妥英鈉對體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細胞(human periodontal ligament fibroblasts,h PDLFs)增殖有促進作用。有研究表明在體外用LPS刺激牙周膜細胞后,其可分泌IL-1β和TNF-α,除此之外,與兩種炎癥因子相關(guān)的的基因的表達水平也明顯地升高[1]。目前尚未有關(guān)于苯妥英鈉對LPS作用下h PDLFs增殖和表達TNF-α的研究,因此本實驗采用不同濃度的苯妥英鈉和LPS與h PDLFs共同培養(yǎng),體外觀察苯妥英鈉對LPS刺激下h PDLFs的生物學(xué)作用,探討其在牙周病癥控制中的作用,為治療牙周病提供一定的依據(jù)。目的1.研究在體外培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞的方法。2.觀察苯妥英鈉(Phenytoin,PHT)對脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下h PDLF增殖的影響。3.觀察苯妥英鈉(Phenytoin,PHT)對脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下h PDLF表達TNF-α的影響。實驗方法1.采用改良酶消組織塊法培養(yǎng)h PDLFs。2.采用四甲基偶氮哇鹽(MTT)比色法檢測苯妥英鈉對LPS作用下的h PDLFs增殖的影響。3.采用免疫細胞化學(xué)法檢測苯妥英鈉對LPS作用hPDLFs表達TNF-α的影響。實驗結(jié)果1.采用改良酶消組織塊法可以培養(yǎng)出h PDLFs,經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定細胞呈長梭形或紡錘形,呈典型的成纖維細胞樣;經(jīng)免疫細胞化學(xué)鑒定抗波形絲蛋白抗體呈陽性,胞質(zhì)呈棕黃色,抗角蛋白抗體呈陰性,胞質(zhì)不著色,證明所培養(yǎng)細胞屬于間充質(zhì)來源。2.MTT法測細胞增殖實驗結(jié)果顯示:不同濃度(0.01mg/L-100mg/L)的LPS均可以明顯地抑制h PDLFs的增殖活性;適宜濃度(5mg/L-100mg/L)的苯妥英鈉可以促進h PDLFs增殖活性,但是過高濃度(500mg/L)的苯妥英鈉會抑制h PDLFs增殖活性。100mg/L的苯妥英鈉可以拮抗LPS對h PDLFs增殖的抑制作用。3.免疫細胞化學(xué)法結(jié)果顯示:LPS明顯地增強了hPDLFs的TNF-α的表達,而100mg/L的苯妥英鈉作用后可明顯地減弱h PDLFs內(nèi)TNF-α的表達。實驗結(jié)論1.苯妥英鈉在適宜的濃度下(5mg/L-100mg/L)對h PDLFs的增殖有促進作用。2.100mg/L的苯妥英鈉不僅能拮抗LPS對h PDLFs的增殖的抑制作用,還可以對TNF-α的表達有抑制作用。3.苯妥英鈉不僅可以控制炎癥,還能促進h PDLFs增殖,因此有可能用于牙周病的治療。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R781.4
【目錄】：

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