本文關(guān)鍵詞： DGI-Ⅱ 多光子顯微鏡 原子力顯微鏡 超微結(jié)構(gòu) DSPP基因　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全Ⅱ型(Dentinogenesis Ⅰmperfect type Ⅱ,DGⅠ-Ⅱ)是一種以牙本質(zhì)發(fā)育缺陷為重要特征的常染色體顯性遺傳病。遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全Ⅱ型引起牙齒嚴(yán)重變色,釉質(zhì)剝脫及牙齒重度磨耗,會(huì)嚴(yán)重影響患者的口腔美觀及咀嚼功能,給患者的身心健康帶來較大的危害,給家庭及社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。自2001年中國學(xué)者率先報(bào)道DGⅠ-Ⅱ相關(guān)致病基因以來,尋找和探討遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育缺陷疾病致病基因及分子發(fā)病機(jī)制一直是本領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。目前所報(bào)道的DGⅠ-Ⅱ致病基因均為DSPP基因,并且發(fā)現(xiàn)不同的致病位點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致相同癥狀出現(xiàn),但DGⅠ-Ⅱ的發(fā)病機(jī)制并不完全明了。此前的研究中本課題組在豫北地區(qū)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不良Ⅰ型(Dentinogenesisi Ⅰmperfect type Ⅰ,DD-Ⅰ)家系,通過深入研究,最終確定該家系的致病基因及部分發(fā)病機(jī)制。通過前面的研究我們初步了解了遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育異常的一些特點(diǎn),并對(duì)牙本質(zhì)發(fā)育的機(jī)制有一定的了解,這為后續(xù)的研究研究奠定了基礎(chǔ)。隨后我們?cè)谕坏貐^(qū)發(fā)現(xiàn)一個(gè)DGⅠ-Ⅱ家系,為了確定該家系的致病基因及病理特點(diǎn),本課題組對(duì)該家系進(jìn)行臨床資料的采集、離體牙病理結(jié)構(gòu)的觀察及致病基因的篩查。研究方法1遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全Ⅱ型家系資料采集我們課題組對(duì)該家系進(jìn)行家系樣本的采集,家系現(xiàn)存4代共34人(存活33人),其中含12例患者(存活11人)。并對(duì)該家系成員進(jìn)行了口腔專科檢查及全身系統(tǒng)性疾病排查,最終將該家系確診為DGⅠ-Ⅱ。隨后繪制家系遺傳圖譜,拍攝口內(nèi)照片及全口曲面斷層片。簽署知情同意書后,我們對(duì)家系中10位患者和10名健康成員進(jìn)行外周血采集,并提取基因組DNA,以便完成后續(xù)的生化檢測(cè)及基因檢測(cè)。2用原子力顯微鏡及多光子顯微鏡觀察DGⅠ-Ⅱ離體牙超微結(jié)構(gòu)拔除家系患者ⅡⅠ-19的兩顆埋伏阻生智齒,同時(shí)收集來自性別相同及年齡相似健康人的兩顆同名牙齒作為對(duì)照。樣本處理后,采用掃描電子顯微鏡、原子力顯微鏡、多光子顯微鏡對(duì)離體牙的組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。3遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全Ⅱ型家系致病基因的篩查為進(jìn)一步確定該DGⅠ-Ⅱ家系的致病突變位點(diǎn),我們對(duì)DSPP的啟動(dòng)子、內(nèi)含子及部分外顯子進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,并用Sanger測(cè)序?qū)CR產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。在DSPP篩查未發(fā)現(xiàn)致病突變時(shí),我們采用連鎖分析及全外顯子測(cè)序等技術(shù)篩查可能的候選基因,并對(duì)這些候選基因進(jìn)行家系共分離研究。研究結(jié)果(1)通過口腔�？茩z查發(fā)現(xiàn)該家系患者具備典型的DGⅠ-Ⅱ特點(diǎn),即牙齒呈乳光色,釉質(zhì)剝脫,牙齒重度磨耗等。從遺傳圖譜可見該家系符合常染色體顯性遺傳的特點(diǎn):疾病代代相傳,患者的雙親必有一方是患者,雙親正常則子女均正常。(2)通過原子力顯微鏡和雙光子顯微鏡可見:(1)牙釉質(zhì)表面粗糙度變大,釉質(zhì)羥基磷灰石晶體排列變得稀疏;(2)牙本質(zhì)羥基磷灰石晶體顆粒度變小,排列較正常牙齒致密,原牙本質(zhì)小管區(qū)被雜亂不規(guī)則的羥基磷灰石晶體填充,表面粗糙度變大;(3)無牙本質(zhì)小管區(qū)出現(xiàn)點(diǎn)狀增強(qiáng)的雙光子激發(fā)熒光信號(hào)和二次諧波信號(hào),牙本質(zhì)區(qū)出現(xiàn)波浪狀增強(qiáng)的雙光子激發(fā)熒光信號(hào),對(duì)應(yīng)區(qū)域二次諧波信號(hào)消失;(4)釉牙本質(zhì)界相鄰的牙釉質(zhì)晶體排列變得稀疏,釉質(zhì)牙本質(zhì)界面有微孔,罩牙本質(zhì)晶體排列致密,顆粒度變小,表面粗糙度變大;(5)鄰近釉牙本質(zhì)界的有機(jī)質(zhì)含量增高。(3)通過Sanger測(cè)序在DSPP基因上并未發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的致病性突變,僅檢測(cè)到3個(gè)SNP位點(diǎn)。連鎖分析顯示該家系致病基因最有可能所在范圍是:4號(hào)染色體的?~88612414bp(GRCh38版本)。全基因組外顯子測(cè)序檢測(cè)到81個(gè)基因發(fā)生突變,經(jīng)生物信息學(xué)分析篩出25個(gè)候選基因,篩查后未發(fā)現(xiàn)致病突變。研究結(jié)論原子力顯微鏡及多光子顯微鏡發(fā)現(xiàn)患牙的牙釉質(zhì)及罩牙本質(zhì)均受累,這有助于加深對(duì)DGⅠ-Ⅱ超微結(jié)構(gòu)的了解�；蚝Y查未發(fā)現(xiàn)致病性突變,后續(xù)需要采用信息量涵蓋更廣的技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。
[Abstract]:This paper studied the pathogenesis of hereditary dentinogenesis . ( 2 ) There are two - photon excitation fluorescence signals and secondary harmonic signals in the dentine of enamel dentin .

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R781.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬淑媛;蔡繼業(yè);吳揚(yáng)哲;詹欣文;;原子力顯微鏡對(duì)牙體硬組織的納米結(jié)構(gòu)分析[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年18期

2 陳惠民,張延武;醫(yī)用光學(xué)顯微鏡的分類介紹[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2004年10期

3 張瑩,史俊南,汪平,王英,顧淑萍;人牙本質(zhì)涎蛋白在人牙胚發(fā)育過程中的表達(dá)和意義[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2003年11期

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本文編號(hào)：1491369