本文關(guān)鍵詞： 改良型富血小板纖維蛋白 富血小板纖維蛋白 軟組織關(guān)閉 軟組織缺損 人牙齦成纖維細(xì)胞 膠原合成 PCR檢測(cè) 掃描電鏡　出處：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過(guò)實(shí)驗(yàn),對(duì)比兩種富血小板纖維蛋白,即改良型富血小板纖維蛋白(Advanced Platelet-Rich Fibrin,A-PRF)和富血小板纖維蛋白(Platelet-Rich Fibrin,PRF),與人牙齦成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)后對(duì)其生長(zhǎng)速度及質(zhì)量的影響,分析自體血液通過(guò)不同離心參數(shù)所得的兩種生物材料各自在影響牙齦生長(zhǎng)過(guò)程中的特點(diǎn),為臨床中選擇對(duì)口腔局部軟組織缺損再生修復(fù)和重塑材料,提供參考。方法:1.人牙齦成纖維細(xì)胞的獲得、培養(yǎng)及鑒定:臨床上收集8例下頜阻生智齒患者拔牙時(shí)切取的齦瓣,以MEM培養(yǎng)基進(jìn)行組織塊培養(yǎng),取第三代細(xì)胞進(jìn)行鼠抗人Vimentin單抗、鼠抗人cytokeratin單抗染色,鑒定是否為成纖維細(xì)胞。當(dāng)原代細(xì)胞生長(zhǎng)至80~90%融合時(shí),開(kāi)始進(jìn)行傳代。2.制備PRF及A-PRF膜:抽取對(duì)應(yīng)的牙齦提供者的肘靜脈血每管5ml,以1500rpm,14min和2700rpm,12min分別離心獲得A-PRF及PRF凝膠,專用工具盒壓制成膜,縱向?qū)ΨQ裁剪成4等份,稱重,修剪至質(zhì)量相等。3.A-PRF膜、PRF膜與細(xì)胞進(jìn)行共同培養(yǎng):實(shí)驗(yàn)設(shè)置分為A-PRF組、PRF組、空白組,同時(shí)調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為3×104個(gè)/ml,A-PRF組平鋪A-PRF膜于培養(yǎng)板底部,PRF組平鋪PRF膜于培養(yǎng)板底部,三組分別加入1000ul細(xì)胞懸液。4.于細(xì)胞加入后的1、3、5、7天,三組分別進(jìn)行CCK-8檢測(cè),測(cè)定細(xì)胞增殖活性。5.于細(xì)胞加入后的1、3、5、7天,三組分別進(jìn)行i型膠原纖維(col1a1)的pcr檢測(cè)。6.于細(xì)胞加入后的1、3、5、7天,a-prf組與prf組分別進(jìn)行掃描電鏡檢測(cè)。7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析cck-8結(jié)果,pcr檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果:1.細(xì)胞培養(yǎng):8組標(biāo)本均順利取材培養(yǎng),無(wú)污染,組織塊培養(yǎng)第7天,于倒置相差顯微鏡下見(jiàn)部分組織塊周圍有細(xì)胞游離,呈梭形,胞體豐滿邊界清晰;第15天,可見(jiàn)組織塊周圍大量細(xì)胞密集布滿,呈放射狀,層疊狀,較規(guī)律,胞體豐滿邊界清晰。2.細(xì)胞鑒定:取第三代細(xì)胞進(jìn)行鑒定,8例標(biāo)本全部對(duì)抗vimentin染色陽(yáng)性,細(xì)胞核染為藍(lán)色,胞漿染為棕色。8例標(biāo)本對(duì)抗cytokeratin染色陰性,細(xì)胞核染為藍(lán)色,胞漿不著色,表明細(xì)胞為間充質(zhì)來(lái)源細(xì)胞。3.cck-8計(jì)數(shù):第1天,三組之間對(duì)比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。第3天,a-prf組與prf組對(duì)比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),兩組分別與空白組對(duì)照,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。第5天,a-prf組與prf組對(duì)比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),a-prf組與空白組對(duì)照有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),prf組與空白組對(duì)照,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。第7天,a-prf組與空白組對(duì)照有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),prf組與空白組對(duì)照,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),a-prf組與prf組之間對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.pcr檢測(cè)i型膠原纖維:第1天,三組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);第3天,a-prf組相對(duì)于prf組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),a-prf組與prf組相對(duì)于空白組皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),且a-prf組共同培養(yǎng)與空白組對(duì)比,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);第5天,a-prf組相對(duì)于prf組和空白組皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),prf組相對(duì)于空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);第7天,a-prf組相對(duì)于prf組和空白組皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),prf組相對(duì)于空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),a-prf組與空白組對(duì)比,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。5.掃描電鏡觀察:接種后第一天,可見(jiàn)完整a-prf和prf膜,其中a-prf膜纖維蛋白呈粗大條索狀交織,prf膜纖維蛋白呈細(xì)密網(wǎng)絡(luò)狀交織,排列規(guī)則整齊,對(duì)比觀察,可見(jiàn)a-prf膜纖維蛋白更加粗大褶皺,prf膜纖維蛋白細(xì)密平整,接種的成纖維細(xì)胞散落在網(wǎng)中,胞體呈圓形邊界清晰,未見(jiàn)明顯黏附痕跡,網(wǎng)絡(luò)間還可見(jiàn)少量紅細(xì)胞嵌入。接種后第三天,a-prf膜粗大纖維結(jié)構(gòu)仍清晰且較規(guī)律,prf膜不再致密平整,變得開(kāi)始凹凸不平。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中少量成纖維細(xì)胞黏附,形態(tài)不再為圓形,形態(tài)扁平且變長(zhǎng),逐漸貼附于纖維蛋白表面。接種后第五天,a-prf膜表面變得粗糙,仍可隱約見(jiàn)纖維蛋白條索輪廓,prf膜較第三天更加粗糙,可見(jiàn)小縫隙。成纖維細(xì)胞密度變大,呈梭形或星形,伸出偽足,緊密貼附于纖維蛋白,有的可見(jiàn)偽足深入縫隙之中。接種后第七天,a-prf膜條索輪廓基本消失,但仍舊有完整結(jié)構(gòu),纖維蛋白仍細(xì)密交織成網(wǎng),prf膜出現(xiàn)缺損。a-prf和prf膜表面都大量黏附成纖維細(xì)胞,梭形,偽足嵌入網(wǎng)中,貼附緊密。結(jié)論:1.成纖維細(xì)胞培養(yǎng)鑒定結(jié)果所示,所得細(xì)胞均為實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)細(xì)胞,即成纖維細(xì)胞,該實(shí)驗(yàn)方法可行。2.A-PRF、PRF均能提高成纖維細(xì)胞增殖活性,且在3-5天促進(jìn)作用最為明顯,A-PRF總體促進(jìn)效果優(yōu)于PRF。3.在創(chuàng)傷愈合早期(術(shù)后7天內(nèi)),A-PRF促進(jìn)膠原纖維沉積的能力優(yōu)于PRF,且優(yōu)于空白組。4.A-PRF以及PRF都能為細(xì)胞的黏附增殖遷徙提供良好的支架和環(huán)境。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R782

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1488497