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機(jī)械壓應(yīng)力環(huán)境中sclerostin對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞功能調(diào)節(jié)機(jī)制的研究

發(fā)布時(shí)間:2017-12-29 18:40

  本文關(guān)鍵詞:機(jī)械壓應(yīng)力環(huán)境中sclerostin對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞功能調(diào)節(jié)機(jī)制的研究 出處:《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文 論文類(lèi)型:學(xué)位論文


  更多相關(guān)文章: 成牙骨質(zhì)細(xì)胞 正畸導(dǎo)致炎性牙根吸收 骨硬化蛋白 BMP/smad通路


【摘要】:在正畸治療過(guò)程中,即使是輕力,也會(huì)出現(xiàn)牙根的吸收與修復(fù),當(dāng)吸收與修復(fù)平衡打破后常常會(huì)出現(xiàn)“正畸導(dǎo)致的炎性牙根吸收(orthodontically induced inflammatory rootresorption,OIIRR)”這一副作用。但目前仍未找到有效預(yù)防和修復(fù)OIIRR的措施,究其原因是因?yàn)槿祟?lèi)對(duì)其發(fā)生機(jī)制認(rèn)識(shí)不足。研究發(fā)現(xiàn)正畸加力后,牙根牙骨質(zhì)在出現(xiàn)不同程度吸收和修復(fù)的同時(shí)伴有成牙骨質(zhì)細(xì)胞的功能活躍。說(shuō)明在受力情況下,成牙骨質(zhì)細(xì)胞對(duì)牙骨質(zhì)再生的各種信號(hào)傳導(dǎo)有重要意義。在正畸力條件下成牙骨質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)功能受多種因子的影響。骨硬化蛋白(sclerostin)是wnt/β-catenin信號(hào)通路的天然抑制劑,可抑制由成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成作用[1]。研究認(rèn)為成骨細(xì)胞中BMP2通過(guò)上調(diào)骨硬化蛋白和DKK1的表達(dá),從而抑制Wnt信號(hào),降低骨量的形成[2]。骨硬化蛋白還受到機(jī)械刺激的調(diào)控,在成熟的成骨細(xì)胞中有高表達(dá),機(jī)械加載可短暫的降低骨硬化蛋白及基因的表達(dá)[3]。成牙骨質(zhì)細(xì)胞與成骨細(xì)胞在形態(tài)上比較相似,但其生物學(xué)功能有根本的區(qū)別。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谘芯吭跈C(jī)械壓應(yīng)力作用下骨硬化蛋白對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)功能調(diào)節(jié)及可能相關(guān)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分:1.機(jī)械壓應(yīng)力刺激條件下成牙骨質(zhì)細(xì)胞OCCM-30中骨硬化蛋白的時(shí)效性表達(dá)目的:探究機(jī)械壓力環(huán)境下occm-30中骨硬化蛋白的時(shí)效性表達(dá),為后期實(shí)驗(yàn)選擇機(jī)械加力的時(shí)間點(diǎn)。方法:用大小為2000μstrain,頻率為0.5hz的單軸壓應(yīng)力對(duì)occm-30細(xì)胞加力;加力時(shí)間分別為(3h,6h,12h,24h),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)設(shè)置加力組和非加力組。用wb檢測(cè)手段檢測(cè)骨硬化蛋白的蛋白(sclerostin)表達(dá)水平,用rt-pcr的方法檢測(cè)骨硬化蛋白的基因(sostmrna)水平。結(jié)果:在各組中均檢測(cè)到骨硬化蛋白的存在,與未加力組比較3h組和6h組加力后骨硬化蛋白的表達(dá)均上調(diào),12h組和24h組則未見(jiàn)明顯差異。結(jié)論:成牙骨質(zhì)細(xì)胞中有內(nèi)源性骨硬化蛋白的存在,機(jī)械壓應(yīng)力刺激可增強(qiáng)骨硬化蛋白的表達(dá)。2.機(jī)械壓應(yīng)力環(huán)境中骨硬化蛋白對(duì)wnt/β-catenin信號(hào)通路及bmp/smad通路的調(diào)控目的:研究機(jī)械壓應(yīng)力環(huán)境中骨硬化蛋白對(duì)牙骨質(zhì)形成相關(guān)wnt/β-catenin信號(hào)通路bmp/samd通路的調(diào)控方法:用含有不同濃度骨硬化蛋白的培養(yǎng)基(0ng/ml,25ng/ml,50ng/ml,100ng/ml)培養(yǎng)細(xì)胞,再用大小為2000μstrain,頻率為0.5hz的單軸壓應(yīng)力加力6h,以未加力未加骨硬化蛋白培養(yǎng)的細(xì)胞為對(duì)照組,wb檢測(cè)β-catenin,p-smad1/5/8,smad1/5/8的蛋白水平。結(jié)果:骨硬化蛋白濃度為0ng/ml時(shí)加力組的p-smad1/5/8表達(dá)高于非加力組,隨著sclerostin濃度的增加p-smad1/5/8的表達(dá)呈現(xiàn)出明顯的下調(diào)趨勢(shì)。而β-catenin和smad1/5/8未顯示出明顯的差異性。結(jié)論:機(jī)械壓力環(huán)境下,骨硬化蛋白增加可下調(diào)BMP/smad通路的表達(dá),對(duì)β-catenin的蛋白表達(dá)無(wú)影響。3.機(jī)械壓應(yīng)力環(huán)境中骨硬化蛋白對(duì)OCCM-30成牙骨質(zhì)相關(guān)因子的影響目的:研究機(jī)械壓應(yīng)力環(huán)境中骨硬化蛋白對(duì)OCCM-30成牙骨質(zhì)相關(guān)因子的影響方法:用含有不同濃度骨硬化蛋白的培養(yǎng)基(0ng/ml,25ng/ml,50ng/ml,100ng/ml)培養(yǎng)細(xì)胞,再用大小為2000μstrain,頻率為0.5Hz的單軸壓應(yīng)力加力6h,以未加力未加骨硬化蛋白培養(yǎng)的細(xì)胞為對(duì)照組,用RT-PCR的方法檢測(cè)Runx-2,OCN,BSP,RANKL,OPG的表達(dá),ALP活性檢測(cè)法檢測(cè)ALP活性結(jié)果:與不加力組比較,加力后Runx-2的表達(dá)下調(diào);在加力條件下sclerostin濃度增加時(shí)Runx-2的表達(dá)也呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì),BSP和OCN的表達(dá)與Runx-2相類(lèi)似。RANKL和OPG的表達(dá):與未加力組比較,加力組RANKL的表達(dá)上調(diào),而OPG的表達(dá)下調(diào);隨著骨硬化蛋白濃度的增加,RANKL的表達(dá)繼續(xù)增加,OPG的表達(dá)繼續(xù)下調(diào)。機(jī)械壓應(yīng)力作用下ALP的活性增加,隨著骨硬化蛋白濃度的增加,ALP的活性呈現(xiàn)出遞減的趨勢(shì)。結(jié)論:機(jī)械壓應(yīng)力的刺激作用下骨硬化蛋白對(duì)與成牙骨質(zhì)細(xì)胞的礦化作用也是抑制的,且可能是通過(guò)BMP信號(hào)通路抑制成骨因子Runx2、OCN、BSP等的表達(dá),促進(jìn)破牙骨質(zhì)相關(guān)因子RANKL/OPG的比值實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類(lèi)號(hào)】:R783.5

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本文編號(hào):1351418

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