發(fā)布時(shí)間：2017-12-23 05:25

  本文關(guān)鍵詞：牙周炎對(duì)肥胖小鼠腎組織的結(jié)構(gòu)及炎癥因子表達(dá)的影響研究　出處：《鄭州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：【目的】(1)建立肥胖合并牙周炎的小鼠模型。(2)檢測(cè)分析模型小鼠各組體內(nèi)血清炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)情況。(3)觀察分析牙周炎對(duì)肥胖模型小鼠的腎組織結(jié)構(gòu),腎組織炎癥因子表達(dá)的影響�！痉椒ā康谝徽�(1)C57BL/6J小鼠44只隨機(jī)分為兩組,其中一組為高脂飼料組(HF)行高脂飼料喂養(yǎng),另一組為低脂飼料組(LF)行低脂飼料喂養(yǎng),每組小鼠各22只。(2)飼養(yǎng)至16周時(shí),兩組分別隨機(jī)選取11只小鼠以牙齦卟啉單胞菌絲線對(duì)小鼠上頜雙側(cè)第二磨牙進(jìn)行真性結(jié)扎,余下小鼠行假性結(jié)扎。結(jié)扎時(shí)間為10天,隨后實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ托∈笱葑優(yōu)樗慕M:單純肥胖組(HFC),肥胖復(fù)合牙周炎組(HFP),單純牙周炎組(LFP),對(duì)照組(LFC)。(3)在小鼠飼養(yǎng)的過程中每周以及結(jié)扎后處死時(shí)測(cè)量匯總所有小鼠的體重?cái)?shù)據(jù),應(yīng)用單因素方差分析來比較高脂飼料組(HF)與低脂飼料組(LF)小鼠體重的差異,以評(píng)估小鼠肥胖模型的建立情況以及肥胖模型的維持情況。(4)結(jié)扎10天處死所有的小鼠以獲取模型小鼠的上頜骨組織并進(jìn)行脫鈣和包埋切片,隨后對(duì)小鼠上頜骨切片進(jìn)行HE染色,定性觀察分析真性結(jié)扎組與假性結(jié)扎組小鼠牙周組織的差異,以評(píng)估小鼠牙周炎模型的建立情況。第二章單眼球取血法獲取小鼠血液,蛋白芯片法檢測(cè)各組小鼠血清內(nèi)炎癥因子TNF-α,IL-1β,IL-6表達(dá)水平的差異。第三章(1)結(jié)扎10天后處死小鼠,獲取小鼠左右兩側(cè)腎組織并稱重。(2)熒光定量PCR檢測(cè)模型小鼠腎組織內(nèi)炎癥因子TNF-α,IL-1β,IL-6的mRNA的表達(dá)。(3)將獲取的小鼠腎組織制作成切片并行HE、Masson染色以及炎癥因子IL-1β的免疫組織化學(xué)染色,以觀察牙周炎對(duì)肥胖模型小鼠的腎組織結(jié)構(gòu)和腎組織內(nèi)炎癥因子表達(dá)水平的影響�！窘Y(jié)果】第一章(1)0周時(shí),高脂飼料組(HF)與低脂飼料組(LF)的小鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.864,P0.05);One-way ANOVA顯示:從飲食誘導(dǎo)第1周開始,高脂飼料組(hf)的小鼠體重大于低脂飼料組(lf)的小鼠體重,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。第16周時(shí)高脂飼料組與低脂飼料組相比,高脂飼料組小鼠體重較低脂飼料組小鼠增加約13.4g(43.5%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。(2)各組小鼠絲線結(jié)扎后第10天,低脂飼料組(lf)的體重下降了約9.7%(3g),高脂飼料組(hf)的體重下降16.1%(7.1g)。第16周結(jié)扎前的高脂飼料組(hf)小鼠體重較同期低脂飼料組(lf)高約43.5%(13.4g),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001);而結(jié)扎后第10天高脂飼料組(hf)小鼠的體重仍較同期低脂飼料組(lf)高約33.5%(9.3g),差異仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。以上結(jié)果表明,為期10天的絲線結(jié)扎過程中,高脂飼料組(hf)與低脂飼料組(lf)小鼠體重均降低,但小鼠在絲線結(jié)扎10天后高脂飼料組(hf)小鼠的體重仍高于低脂飼料組(lf)約33.5%。根據(jù)體重超過對(duì)照組10g或20%為顯性肥胖的標(biāo)準(zhǔn),模型小鼠仍處于顯性肥胖的狀態(tài)。(3)100倍鏡下,肥胖復(fù)合牙周炎組(hfp)與單純牙周炎組(lfp)均表現(xiàn)為:牙齦乳頭萎縮,牙齦上皮根向移位,牙槽嵴頂吸收;單純肥胖組(hfc)與對(duì)照組(lfc)均表現(xiàn)為:牙齦乳頭完整,牙齦上皮無明顯移位,牙槽嵴頂無明顯吸收;200倍鏡下發(fā)現(xiàn)肥胖復(fù)合牙周炎組(hfp)與單純牙周炎組(lfp)牙槽骨內(nèi)均可見呈點(diǎn)狀分布的破骨細(xì)胞;單純肥胖組(hfc)與對(duì)照組(lfc)均未見明顯的破骨細(xì)胞分布。第二章(1)對(duì)于tnf-α,肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=0.061,p=0.806)。不同飼料組的tnf-α的血清濃度差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=1.904,p=0.173),不同結(jié)扎組的tnf-α的血清濃度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。真性結(jié)扎組(p)的tnf-α血清濃度水平顯著低于假性結(jié)扎組(c)(f=13.6,p0.001)。單因素方差分析顯示,與單純肥胖組(hfc)相比,肥胖復(fù)合牙周炎組血清炎癥因子的tnf-α濃度顯著降低,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。(2)對(duì)于il-1β,肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=1.259,p=0.266)。不同飼料組、不同結(jié)扎組的il-1β的血清濃度差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。高脂飼料組(hf)的il-1β血清濃度水平顯著高于低脂飼料組(lf)(f=15.375,p0.001),真性結(jié)扎組(p)的il-1β血清濃度水平顯著低于假性結(jié)扎組(c)(f=5.056,p=0.028)。單因素方差分析顯示,單純肥胖組(hfc)的il-1β血清濃度水平顯著高于對(duì)照組(lfc)(f=11.045,p=0.002),也顯著高于肥胖復(fù)合牙周炎組(hfp)(f=19.948,p0.001)。(3)對(duì)于il-6,肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=19.316,p0.001)。不同飼料組、不同結(jié)扎組的血清il-6濃度差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。高脂飼料組(hf)的血清il-6濃度水平顯著高于低脂飼料組(lf)(f=26.837,p0.001),真性結(jié)扎組的血清il-6濃度水平顯著低于假性結(jié)扎組(f=12.4,p=0.001)。單因素方差分析顯示,單純肥胖組(hfc)的血清il-6濃度水平顯著高于對(duì)照組(lfc)(f=22.841,p0.001),也顯著高于肥胖復(fù)合牙周炎組(hfp)(f=16.715,p0.001)。第三章(1)對(duì)于結(jié)扎10天后小鼠腎組織重量,肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=3.985,p=0.506)。不同飼料組的小鼠腎組織重量差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。高脂飼料組(hf)的小鼠腎組織重量顯著高于低脂飼料組(lf)(f=18.2,p0.001)。t檢驗(yàn)分析顯示,單純肥胖組(hfc)的小鼠腎組織重量顯著高于對(duì)照組(lfc)(t=20.188,p=0.001)。(2)he染色:高脂飼料組(hf)小鼠的腎組織均表現(xiàn)為空泡性變,病變位置多位于腎小管管壁,腎小管上皮細(xì)胞腫脹,嚴(yán)重者可見腎小管形態(tài)結(jié)構(gòu)消失;低脂飼料組(lf)小鼠腎組織結(jié)構(gòu)分明,腎小管結(jié)構(gòu)清晰,未見明顯的腎組織結(jié)構(gòu)變化。而單純牙周炎組(hfp)小鼠腎組織與對(duì)照組(lfc)小鼠腎組織結(jié)構(gòu)清晰,無明顯結(jié)構(gòu)上的差異。(3)masson染色:四組小鼠腎組織均未見明顯的膠原纖維沉積。(4)對(duì)于腎臟內(nèi)炎癥因子tnf-α、il-1β和il-6的mrna的表達(dá),肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=0.659,p=0.427;f=0.494,p=0.491;f=0.434,p=0.519),不同飼料組的tnf-α、il-1β和il-6的2-△△ct值差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=0.498,p=0,49;f=0.298,p=0.484;f=0.066,p=0.396),不同結(jié)扎組的tnf-α、il-6的2-△△ct差別亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=0.244,p=0,627;f=0.377,p=0.547),而不同結(jié)扎組的il-1β的2-△△ct值差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。真性結(jié)扎組(p)的il-1β的2-△△ct值顯著高于假性結(jié)扎組(c)(f=4.727,p=0.043)。t檢驗(yàn)分析顯示,兩個(gè)飼料組,兩個(gè)結(jié)扎組間炎癥因子tnf-α、il-1β和il-6的2-△△ct值的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)il-1β免疫組化染色:單純肥胖組(hfc)、肥胖復(fù)合牙周炎組(hfp)、單純牙周炎組(hfp)的小鼠腎組織內(nèi)炎癥因子il-1β表達(dá)量均較對(duì)照組(lfc)高。t檢驗(yàn)分析顯示,單純牙周炎組(lfp)較對(duì)照組(lfp)腎組織內(nèi)il-1β表達(dá)量顯著升高(p0.005),而單純肥胖組(hfc)、肥胖復(fù)合牙周炎組(hfp)的小鼠腎組織內(nèi)炎癥因子il-1β表達(dá)量無明顯差異,但均高于對(duì)照組(lfc)。【結(jié)論】第一章肥胖復(fù)合牙周炎小鼠模型建立成功。第二章牙周炎可能有刺激小鼠血清TNF-α、IL-β、IL-6表達(dá)下調(diào),肥胖可能有刺激小鼠血清IL-β、IL-6表達(dá)上調(diào)的作用。第三章(1)飲食誘導(dǎo)肥胖可能導(dǎo)致腎臟組織肥大,發(fā)生空泡樣變。(2)牙周炎可能有刺激上調(diào)腎組織炎癥因子IL-1β表達(dá)的作用。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781.42

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本文編號(hào)：1322602