發(fā)布時間：2017-12-21 02:04

  本文關鍵詞：Runx2與Osx在修復性牙本質形成過程中表達的研究　出處：《第三軍醫(yī)大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景和目的:齲損和外傷是能引起牙髓炎性損傷,并最終導致人類牙列缺損的重要病因。然而當牙齒發(fā)生齲損、物理摩擦,外傷等輕微損傷時,髓腔內(nèi)的牙髓細胞會發(fā)生遷徙,增殖,并分化為成牙本質細胞,進而礦化成熟,成為反應性牙本質,亦稱修復性牙本質。研究牙髓的損傷后修復機制為保存患牙提供了可能。Runx相關轉錄因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)和Osx(Osterix)是骨發(fā)生及骨形成中重要轉錄因子,近期研究發(fā)現(xiàn)兩者均參與調控牙齒的發(fā)生和形成。牙本質涎磷蛋白(Dentin sialoph-osphoprotein,DSPP)是成牙本質細胞分化成熟的標志性蛋白,研究已證實其轉錄受Runx2調控。成骨相關報道中提示,Osx是Runx2的下游基因,Runx2基因有缺陷時,檢測不到Osx的表達,Osx激動子區(qū)域有Runx2特有的結合元素,Runx2通過與其相結合,直接調控Osx的表達和功能,但二者在修復性牙本質形成過程中是否發(fā)揮功能仍不明了,而在牙齒發(fā)育過程中,Osx可以調節(jié)DSPP的表達。因此,本課題建立大鼠牙髓損傷模型,觀察損傷后不同時期修復性牙本質形成過程中Runx2和Osx基因表達模式的變化,初步探討Runx2和Osx與修復性牙本質形成之間的關系。方法:1.建立大鼠牙髓損傷模型。60只體質量約為200g的雄性大鼠隨機分為正常對照組和損傷模型組(n=10)�？鞕C球鉆在50只損傷模型組大鼠雙側下頜第一磨牙常規(guī)行開髓術,開髓后不做任何處理,以髓腔暴露時間0h,3h,12h,3d及7d對損傷模型組進行分組,正常對照組不做開髓處理。隨后每組隨機選取4只灌注處死(共24只),取其雙側下頜第一磨牙及周圍下頜骨標本并制成切片,以蘇木精-伊紅(HE)染色法確定牙髓損傷模型的建立。2.觀察Runx2、Osx和DSPP的蛋白和m RNA在大鼠下頜第一磨牙修復性牙本質形成時表達模式的變化。通過免疫熒光的方法對正常對照組及損傷0h,3h,12h,3d及7d組標本制備的切片進行染色,共聚焦顯微鏡下觀察Runx2、Osx和DSPP蛋白在各模型組中表達模式的變化。脫頸處死正常對照組及損傷0h,3h,12h,3d及7d組大鼠(共36只)并提取雙側下頜第一磨牙,運用實時熒光定量PCR法(Real-time PCR),對其總RNA進行定量分析,比較Runx2、Osx和DSPP m RNA在各組模型中表達量的變化。結果:1.牙髓損傷后成牙本質細胞遷徙變性,損傷下方出現(xiàn)急性炎癥特征,在損傷7d,在損傷下方牙髓腔內(nèi)可見修復性牙本質樣結構形成。2.Real-time PCR法檢測發(fā)現(xiàn):Runx2 m RNA表達量在損傷后12h最高,且顯著高于對照組(P0.01),損傷后3d,Runx2 m RNA表達量顯著低于損傷后12h組(P0.01),直至損傷后7d,Runx2 m RNA表達量持續(xù)降低,明顯低于損傷后12h組及3d組(P0.01),但較之正常對照組其表達量有顯著差異。Osx和DSPP m RNA的表達量在損傷后0h較之對照組無明顯差異(P0.05),從損傷后3h開始表達量呈逐漸上升趨勢,且明顯高于對照組,組間比較均有顯著差異(P0.01);免疫熒光染色發(fā)現(xiàn):Runx2、Osx和DSPP蛋白主要表達于損傷下方,Runx2表達呈“拋物線”狀,損傷后3天表達最為強烈(P0.01),隨后逐漸下降;Osx和DSPP表達均呈逐漸上調的趨勢,Osx蛋白表達在損傷后7天上調最為明顯(P0.01),而DSPP蛋白則在損傷后3天表達顯著增強(P0.01)。結論:1.出生后的大鼠在牙髓組織受到機械作用時,發(fā)生炎癥反應,大鼠磨牙牙髓具有形成修復性牙本質的潛能。2.Runx2、Osx和DSPP在牙髓損傷后的不同時期具有不同的表達模式,在不同部位表達模式亦不同。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R781

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 胡超;李適廷;張綱;譚穎徽;;NICD過表達對人牙髓干細胞細胞增殖及細胞遷移的影響[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2014年04期

2 張馳;;成骨細胞特異性轉錄因子Osterix對骨形成作用的分子機制(英文)[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2012年05期

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本文編號：1314244