本文關(guān)鍵詞：促紅細(xì)胞生成素對(duì)牙髓干細(xì)胞向神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的作用研究

  更多相關(guān)文章： EPO 牙髓干細(xì)胞 神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 分化

【摘要】：研究背景:視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cell,RGC)是形成視覺(jué)的重要組成部分。眾多致盲性眼病如青光眼等,會(huì)引起神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷或進(jìn)行性凋亡。為了解決這一臨床問(wèn)題,國(guó)內(nèi)外學(xué)者將研究焦點(diǎn)聚集于干細(xì)胞。干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞。研究表明將這類(lèi)有多向分化潛能的干細(xì)胞給予特定的誘導(dǎo)條件,可使其分化成具有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞功能的類(lèi)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,有望代替受損的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞完成視路,從而達(dá)到恢復(fù)患者視功能的目的。但由于目前誘導(dǎo)能力有限,仍需更強(qiáng)的誘導(dǎo)因子。促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)是一種由腎皮質(zhì)和肝臟分泌的激素樣物質(zhì)。它不僅可以促進(jìn)局部細(xì)胞的生長(zhǎng),而且作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,它具有促進(jìn)神經(jīng)發(fā)育、促進(jìn)損傷神經(jīng)再生及保護(hù)神經(jīng)的作用。但其在誘導(dǎo)干細(xì)胞成神經(jīng)分化過(guò)程中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。基于牙髓干細(xì)胞取材容易、來(lái)源豐富等特點(diǎn),我們擬研究EPO對(duì)牙髓干細(xì)胞向神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分化的作用。目的:研究EPO對(duì)牙髓干細(xì)胞成神經(jīng)分化的作用,并初步探討其機(jī)制。方法:收集完整拔除的健康成年人阻生第三磨牙,經(jīng)過(guò)滅菌處理后,在無(wú)菌條件下,劈開(kāi)牙冠,取出牙髓。經(jīng)充分沖洗、剪碎和消化后,獲得原代牙髓干細(xì)胞單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞置于20%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng),培養(yǎng)至第3代,接種于6cm培養(yǎng)皿。將細(xì)胞分為四組:DMEM/F12組、DMEM/F12+EPO組、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件誘導(dǎo)液組、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件誘導(dǎo)液+EPO組,每3天換一次液,待細(xì)胞生長(zhǎng)至70-80%融合時(shí)(或接種24-48小時(shí)后),加入視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件分化液進(jìn)行誘導(dǎo)。在特定的時(shí)間點(diǎn),進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。首先,通過(guò)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài);再通過(guò)MTT法測(cè)定牙髓干細(xì)胞誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞的生存能力;最后通過(guò)Real-Time PCR技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志基因Map2、Hes1和Atoh7的表達(dá),進(jìn)一步探討EPO在牙髓干細(xì)胞向神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞分化過(guò)程中的作用和機(jī)制。結(jié)果:分離培養(yǎng)的牙髓干細(xì)胞主要呈長(zhǎng)梭形,部分有1-2個(gè)突起,分布均勻;誘導(dǎo)3天后,在倒置顯微鏡下可觀察到部分牙髓干細(xì)胞形態(tài)開(kāi)始發(fā)生變化,細(xì)胞變圓,出現(xiàn)突起,呈現(xiàn)類(lèi)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài);通過(guò)MTT法,發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件誘導(dǎo)液+EPO組細(xì)胞生存能力與視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件分化液組的生存能力相似,兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;Real-Time PCR結(jié)果提示:在第7天,與DMEM/F12組相比,視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件誘導(dǎo)液組、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件誘導(dǎo)液+EPO組,Map2、Hes1、Atoh7基因的表達(dá)均有顯著提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。且視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件分化液+EPO組的基因表達(dá)高于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞條件分化液組,Map2和Atoh7基因差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:EPO可以促進(jìn)牙髓干細(xì)胞向神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞分化。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R781

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本文編號(hào)：1298401