本文關(guān)鍵詞：PDGF-BB對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞增殖、分化及礦化影響的體外實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:骨改建是正畸牙移動(dòng)的生物學(xué)基礎(chǔ),是一個(gè)由生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的過(guò)程,其重要的功能細(xì)胞是成牙骨質(zhì)細(xì)胞,而血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)是與骨修復(fù)密切相關(guān)的生長(zhǎng)因子之一。本實(shí)驗(yàn)旨在探討PDGF-BB對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞(OCCM-30)增殖分化、礦化以及OPN和BSP基因表達(dá)的影響。為臨床上是否能夠應(yīng)用血小板衍生生長(zhǎng)因子有效預(yù)防牙根吸收或促進(jìn)牙根吸收后修復(fù)提供體外實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:將體外培養(yǎng)OCCM-30分為6組(5個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組):用培養(yǎng)基制備的不同濃度的PDGF-BB(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml)的OCCM-30作為實(shí)驗(yàn)組,只加入培養(yǎng)基的OCCM-30作為對(duì)照組。本實(shí)驗(yàn)對(duì)以下項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè):應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(24h、48h、72h)細(xì)胞的增殖情況;應(yīng)用PNPP法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(48h、72h)細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性;觀察不同時(shí)間(第1天至第7天)細(xì)胞產(chǎn)生礦化結(jié)節(jié)的情況,應(yīng)用茜素紅染色法在第7天對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色并測(cè)出礦化結(jié)節(jié)含量;應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)方法測(cè)定細(xì)胞72h時(shí)OPNm RNA和BSPm RNA基因的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS Statistics V 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1.MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示:不同濃度的PDGF-BB作用OCCM-30 24h、48h、72h后,各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組吸光度值分析結(jié)果顯示:5ng/ml組吸光度值比對(duì)照組低,但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),這表明低濃度的PDGF-BB對(duì)細(xì)胞的抑制作用不顯著。10ngml、20ngml、30ngml、40ngml組吸光度值均比對(duì)照組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說(shuō)明這幾個(gè)濃度的PDGF-BB對(duì)OCCM-30有促增殖作用,其中20ng/ml組的吸光值達(dá)到最高。三個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中72h高于48h,48h高于24h,說(shuō)明PDGF-BB對(duì)OCCM-30的促增殖作用隨著時(shí)間的增加而增強(qiáng)。2.PNPP法檢測(cè)堿性磷酸酶(ALP)活性結(jié)果顯示:不同濃度的PDGF-BB作用于OCCM-3048h和72h后,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的ALP活性比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),其中20ng/ml組與對(duì)照組的差異性最大,這表明20ng/ml的PDGF-BB對(duì)OCCM-30的ALP活性的促進(jìn)作用最為明顯。對(duì)48h和72h各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且72h的各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的均值都大于48h,這說(shuō)明不同濃度的PDGF-BB對(duì)OCCM-30的ALP活性72h比48h更強(qiáng)。3.茜素紅染色檢測(cè)礦化結(jié)節(jié)含量:不同濃度的PDGF-BB作用于OCCM-30觀察發(fā)現(xiàn),第7天各實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)明顯礦化結(jié)節(jié),茜素紅染色可見(jiàn)眾多大小不一、形態(tài)各異的礦化結(jié)節(jié)。各組檢測(cè)OD570后統(tǒng)計(jì)結(jié)果;各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);5ng/ml組均值低于對(duì)照組,10、20、30ng/ml組逐漸升高,40ng/ml下降,在30ng/ml組達(dá)到峰值,這表明在本實(shí)驗(yàn)條件下30ng/ml的礦化作用最為明顯。4.OPN和BSP的基因表達(dá):分別計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的灰度比值(目的基因/內(nèi)參),將各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),這說(shuō)明不同濃度PDGF-BB作用OCCM-30 72h后OPN和BSP基因的表達(dá)具有促進(jìn)作用。結(jié)論:1.不同濃度的PDGF-BB對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞在12h至72h具有促進(jìn)增殖、分化的作用,濃度為20ng/ml對(duì)OCCM-30的促增殖作用最強(qiáng)。2.不同濃度的PDGF-BB在第7天可以促進(jìn)成牙骨質(zhì)細(xì)胞形成礦化結(jié)節(jié),在第7天濃度為30ng/ml促進(jìn)作用最為明顯。3.PDGF-BB在72h對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞有促進(jìn)OPN和BSP基因表達(dá)的作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R783.5

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 包麗娜;任柏林;黃蘭;白丁;;機(jī)械應(yīng)力刺激對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞骨涎蛋白mRNA表達(dá)影響的體外研究[J];廣東牙病防治;2011年06期

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3 呂昕;肖明振;李艷君;趙蕊妮;;牙骨質(zhì)附著蛋白對(duì)牙囊細(xì)胞增殖的影響[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2008年03期

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本文編號(hào)：1215006