本文關(guān)鍵詞：牙囊干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨的體外研究

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【摘要】：目的成體干細(xì)胞具有多向分化能力,通過實(shí)驗(yàn)可以誘導(dǎo)分化成多種細(xì)胞系。因此,這些細(xì)胞是實(shí)現(xiàn)組織再生工程的關(guān)鍵部分。其中,研究最多的是造血干細(xì)胞系和間充質(zhì)細(xì)胞系。最近,研究表明牙齒組織中的間充質(zhì)干細(xì)胞存在于牙髓,牙周膜和牙囊中。牙囊是牙齒發(fā)育期間包繞成釉器和牙乳頭的疏松結(jié)締組織。而且牙囊干細(xì)胞(Dental Follicle Stem Cells,DFSC)具備干細(xì)胞特性,使其成為一種新型的種子細(xì)胞應(yīng)用于牙周組織工程中。本實(shí)驗(yàn)通過體外分離培養(yǎng)和鑒定牙囊干細(xì)胞,并研究DFSC的成骨能力,為其在牙周組織工程中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。方法首先臨床上選取因正畸治療等需要拔除的第三磨牙,分別來自于身體健康的患者(12~16歲),結(jié)合組織塊法和酶消化法分離培養(yǎng)DFSC;用有限稀釋法純化細(xì)胞,取第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn);鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并記錄,免疫組化染色波形絲蛋白和角蛋白鑒定細(xì)胞來源,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD44、CD90、CD105和CD146,CCK-8檢測(cè)DFSC的生長曲線;成骨誘導(dǎo)1d,4d,7d,14d和21d后,通過堿性磷酸酶和茜素紅染色、Real-time PCR和Western-blot檢測(cè)成骨/成牙骨質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)記物的表達(dá)來評(píng)估牙囊干細(xì)胞的成骨能力。結(jié)果牙囊組織經(jīng)酶消化法和組織塊法培養(yǎng),24h后可見細(xì)胞從組織塊邊緣爬出,培養(yǎng)第3天,組織塊旁邊可見大量長梭型細(xì)胞和少量多角形細(xì)胞,純化的DFSC成長梭型;DFSC免疫組化染色,陽性表達(dá)波形絲蛋白,而陰性表達(dá)角蛋白;DFSC高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD44、CD90、CD105和CD146;DFSC的生長曲線呈“S”形,前兩天細(xì)胞生長緩慢,第3天開始細(xì)胞呈快速增殖趨勢(shì),第10天細(xì)胞增殖停滯,進(jìn)入平臺(tái)期;DFSC成骨誘導(dǎo)7天,堿性磷酸酶(ALP)染色陽性,隨著誘導(dǎo)時(shí)間增加,ALP表達(dá)增強(qiáng),成骨誘導(dǎo)14天,茜素紅染色鏡下可見明顯的鈣結(jié)節(jié)產(chǎn)生,隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加,鈣結(jié)節(jié)數(shù)量增加;隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加,其成骨相關(guān)基因ALP、OCN、BMP2和RUNX2的表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05);成骨蛋白表達(dá)趨勢(shì)與m RNA水平相似,其中,BMP2、OCN、ALP和RUNX2在誘導(dǎo)第七天(相對(duì)于第4天)時(shí),蛋白表達(dá)量顯著增加(P0.05),然后表達(dá)逐漸平穩(wěn)(P0.05)。結(jié)論DFSC易于獲得且來源豐富,低免疫原性,并且不存在倫理爭(zhēng)議,同時(shí)它具有較強(qiáng)的增殖和成骨能力,因此,它是牙周組織再生工程中良好的種子細(xì)胞,必將為牙周組織再生治療開辟新的途徑。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781

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1 金作林,林珠;集落刺激因子在人牙囊細(xì)胞中的表達(dá)[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2002年02期

2 谷海晶,凌均h，

本文編號(hào)：1197917