本文關(guān)鍵詞：遺傳性眶距過寬面部畸形患者的臨床檢查及遺傳學(xué)分析

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【摘要】：顱面畸形(Craniofacial Deformity,CD)是一種影響人類頭、面、頸發(fā)育的先天性疾病,占先天性出生缺陷病的四分之三。眶距過寬是某些顱面畸形疾病的臨床表現(xiàn),常伴隨其他特殊癥狀出現(xiàn),如突眼、并趾、智力異常等。目前已知多種顱面畸形如顱面裂隙畸形、顱縫早閉癥等均可表現(xiàn)出眶距過寬,雖然染色體的變異或基因突變可引起眶距過寬相關(guān)疾病的發(fā)生,但目前其致病機(jī)制尚不清楚。在詳細(xì)收集家系臨床信息的基礎(chǔ)上,本課題從染色體到基因水平對兩個(gè)表現(xiàn)出遺傳性眶距過寬家系進(jìn)行了系統(tǒng)研究。通過探尋兩個(gè)家系相應(yīng)疾病的致病原因,為同類型疾病的診斷以及臨床干預(yù)治療提供理論依據(jù),基因診斷明確后可為患者及其家庭成員進(jìn)行發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估甚至指導(dǎo)產(chǎn)前診斷。第一部家系一的臨床檢查及遺傳學(xué)研究1材料和方法1.1臨床檢查分別采集家系一患者及正常成員的詳細(xì)病史、遺傳學(xué)信息,患者進(jìn)行必要的體格檢查及相關(guān)�？茩z查;1.2全血基因組DNA提取抽取家系患者及正常成員的外周血液樣本,提取全血基因組DNA;1.3核型分析對家系一患者進(jìn)行染色體G顯帶核型分析實(shí)驗(yàn),觀察染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量的情況;1.4 a CGH檢查采用微陣列比較基因組雜交技術(shù)檢測患者是否存在染色體拷貝數(shù)變異(Copy Number Variant,CNV);1.5 CNV驗(yàn)證對a CGH發(fā)現(xiàn)的CNV設(shè)計(jì)相應(yīng)的引物,利用熒光定量PCR進(jìn)行了家系共分離驗(yàn)證;針對缺失片段的STS區(qū)域進(jìn)行雜合性缺失分析(Loss of Heterozygosity,LOH),確定CNV的遺傳方式。2結(jié)果家系一先證者主要表現(xiàn)為輕度到中度智力障礙和眶距過寬、高額頭和寬鼻根等特殊面容;患者III-3臨床表現(xiàn)與之相似但無明顯智力發(fā)育障礙。先證者有兩個(gè)哥哥,已故,均表現(xiàn)出嚴(yán)重的智力障礙和發(fā)育障礙。家系的其他成員身體均健康,智力正常�；颊吆诵头治鼋Y(jié)果正常,a CGH檢查發(fā)現(xiàn)患者II-3和III-3各自攜帶3個(gè)CNV,結(jié)合家系正常成員a CGH結(jié)果分析和DGV、ISCA數(shù)據(jù)庫比對,鎖定chr14q32.32q32.33的微重復(fù)和chr17p13.3的微缺失為家系的致病CNV。熒光定量PCR和LOH分析間接證明了這兩個(gè)CNV的致病性和遺傳途徑。3結(jié)論本研究中患者同時(shí)攜帶chr14q32.32-q32.3微重復(fù)和chr17p13.3微缺失兩種拷貝數(shù)變異并表現(xiàn)出兩種綜合征的臨床特征。上述兩個(gè)拷貝數(shù)變異為該家系遺傳性眶距過寬的致病原因,本研究首次發(fā)現(xiàn)患者同時(shí)攜帶這兩種CNV并且出現(xiàn)在同一綜合征里。第二部家系二的臨床檢查及遺傳學(xué)研究1材料和方法1.1臨床檢查分別采集家系二患者及正常成員的詳細(xì)病史、遺傳學(xué)信息,患者進(jìn)行必要的體格檢查及相關(guān)專科檢查;1.2全血基因組DNA提取抽取家系患者及家系其他成員的外周血液樣本,提取全血基因組DNA;1.3已知基因篩查利用Sanger測序?qū)蜻x疾病致病基因的外顯子及其旁翼區(qū)的堿基序列進(jìn)行基因突變檢測;1.4核型分析對家系所有患者進(jìn)行染色體G顯帶核型分析實(shí)驗(yàn),觀察染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量的情況;1.5 aCGH檢查采用微陣列比較基因組雜交技術(shù)檢測患者染色體拷貝數(shù)變異情況;1.6二代測序探尋致病基因選取合適的樣本進(jìn)行全外顯子組測序以及分析測序數(shù)據(jù),根據(jù)家系遺傳特征制定個(gè)性化篩選策略并篩選出可能的候選基因,基于GO的候選基因功能進(jìn)行富集分析。2結(jié)果家系二連續(xù)3代均有患者表現(xiàn)出嚴(yán)重的眶距過寬的面部異常,遺傳方式呈顯性遺傳。部分患者除了明顯的眶距過寬的表現(xiàn)之外,還有其他特殊癥狀,家系其他成員身體健康。經(jīng)過已知致病基因篩查、染色體核型分析、a CGH檢查未找到相關(guān)染色體變異和致病基因突變位點(diǎn)。全外顯子組測序以及相關(guān)數(shù)據(jù)分析獲得96個(gè)候選基因,GO分析發(fā)現(xiàn)在“肽酶活性”功能和“細(xì)胞粘附”功能領(lǐng)域候選基因富集程度較高。3結(jié)論家系二患者的致病原因復(fù)雜,經(jīng)過已知基因篩查、核型分析和a CGH的檢測未發(fā)現(xiàn)患者存在致病位點(diǎn)或染色體變異,排除家系疾病原因與染色體異常或Pfeiffer綜合征、Crouzon綜合征、Apert綜合征和顱額鼻綜合征相關(guān)。根據(jù)二代測序以及數(shù)據(jù)分析提示家系二患者疾病的致病基因可能與某些“肽酶活性”和“細(xì)胞粘附”功能相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R782.2
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本文編號(hào)：1167926