本文關(guān)鍵詞：分化轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子Hey1在成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞發(fā)生中的作用及其機(jī)制的初步研究

  更多相關(guān)文章： Notch信號(hào)通路 成牙本質(zhì)細(xì)胞 分化 骨形態(tài)形成蛋白2 hairy相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1

【摘要】：成牙本質(zhì)細(xì)胞是單層排列于牙髓組織最外層的高度分化細(xì)胞。成牙本質(zhì)細(xì)胞的主要功能是生成構(gòu)成牙體硬組織最主要部分的牙本質(zhì)。當(dāng)牙髓受到齲源相關(guān)性細(xì)菌刺激或者直接外力損傷等破壞時(shí),相關(guān)部位的這些成牙本質(zhì)細(xì)胞可能死亡。然而這些損傷又能夠刺激成熟牙髓組織中的一些前體細(xì)胞分化成為一種“成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞”,這種細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞的特性非常相似。成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的分化受到很多信號(hào)通路的調(diào)控,如TGF/smads、FGF、Wnt和Notch信號(hào)通路。在這些通路中,Notch信號(hào)通路被認(rèn)為和細(xì)胞分化密切相關(guān)。Notch信號(hào)通路的下游分子Hey1,也可能參與成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的分化。Hey1(也被稱為Hesr1、HRT1或HERP2)是屬于HERP(hairy/Enhancer of split-related protein)家族的轉(zhuǎn)錄因子。HERP家族多為轉(zhuǎn)錄抑制物。Hey1被證明是Notch信號(hào)通路下游RBP-Jk的直接效應(yīng)分子,其功能為細(xì)胞核效應(yīng)器,并且在多種細(xì)胞分化過程中被證明是一個(gè)關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)Hey1在牙髓組織中有表達(dá),然而Hey1在成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞分化過程中的作用和機(jī)制卻尚不清楚。在本課題的研究中,我們觀察了Hey1在OLC細(xì)胞系(odontoblast-lineage cell line)受到兩種分化誘導(dǎo)液——添加l-抗壞血酸(aa)、β-磷酸甘油(gp)和地塞米松(dex)的培養(yǎng)液以及添加rh-bmp2的培養(yǎng)液——刺激時(shí)的表達(dá)情況。之后將包含hey1編碼全長(zhǎng)的質(zhì)粒和hey1shrna基因沉默的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染入olc細(xì)胞系以構(gòu)建hey1過表達(dá)及表達(dá)抑制的細(xì)胞系(分別命名為olc/hey1op和olc/hey1kd)。通過比較這些細(xì)胞系分化及礦化等能力之間的差異,探索hey1在成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞分化過程中可能發(fā)揮的作用。本研究將有助于為hey1進(jìn)一步應(yīng)用于牙髓牙本質(zhì)再生或活髓保存治療提供新的思路。結(jié)果如下:1.hey1過表達(dá)對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞發(fā)生的影響將包含hey1編碼全長(zhǎng)的真核表達(dá)質(zhì)粒pef-dest51-hey1轉(zhuǎn)染至olc細(xì)胞系,rt-pcr及western-blot驗(yàn)證建立的olc/hey1op細(xì)胞系能夠穩(wěn)定過表達(dá)hey1。之后用以上兩種分化誘導(dǎo)液刺激細(xì)胞。發(fā)現(xiàn):olc/hey1op細(xì)胞中dspp、alp等礦化相關(guān)基因較正常olc細(xì)胞顯著上調(diào),western-blot及免疫熒光檢測(cè)dsp蛋白表達(dá)量也上調(diào)。olc/hey1op細(xì)胞在誘導(dǎo)后的alp分泌活性高于olc細(xì)胞,茜素紅s染色發(fā)現(xiàn)其礦化結(jié)節(jié)形成能力也較高。2.hey1基因抑制對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞發(fā)生的影響我們采用rna干擾的方法建立了hey1基因表達(dá)抑制的穩(wěn)定細(xì)胞系olc/hey1kd,定量pcr驗(yàn)證表明olc/hey1kd中hey1表達(dá)顯著降低。與hey1過表達(dá)相反,我們發(fā)現(xiàn)hey1的缺失會(huì)下調(diào)分別經(jīng)過兩種分化誘導(dǎo)液刺激后細(xì)胞礦化相關(guān)基因的mrna水平。olc/hey1kd細(xì)胞受刺激后的alp分泌活性及形成礦化結(jié)節(jié)的能力也低于正常olc細(xì)胞。3.notch信號(hào)抑制劑對(duì)hey1在成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞發(fā)生中作用的影響為了進(jìn)一步研究hey1調(diào)節(jié)成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞分化的功能是否由notch信號(hào)通路激活的,我們應(yīng)用dapt抑制notch信號(hào)通路以觀察hey1以及olc細(xì)胞分化功能的改變。結(jié)果表明1μmol/ldapt能夠有效抑制olc細(xì)胞中hey1的表達(dá)。與預(yù)先設(shè)想不同的是,在aa+gp+dex誘導(dǎo)液刺激時(shí)dapt會(huì)提高olc細(xì)胞的分化能力,而在用rh-bmp2誘導(dǎo)液刺激時(shí),olc細(xì)胞的分化能力則受到dapt抑制,而過表達(dá)Hey1的細(xì)胞能夠抵消這種抑制作用。這提示Hey1可能并不單是Notch信號(hào)通路的效應(yīng)因子,也可能是不同信號(hào)通路之間互相作用的中間環(huán)節(jié)。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宋瑋,趙守亮,石勇,何文喜;人成牙本質(zhì)細(xì)胞的分離和鑒定[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2005年02期

2 吳禮安;文玲英;楊富生;王小競(jìng);;尼古丁抑制成牙本質(zhì)細(xì)胞增殖及作用機(jī)制的研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

3 王捍國(guó),肖明振,趙守亮,郝建軍;人成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的原代培養(yǎng)[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2002年02期

4 吳禮安,文玲英,楊富生,劉勇;成牙本質(zhì)細(xì)胞中上游刺激因子1表達(dá)的原位雜交研究[J];上�？谇会t(yī)學(xué);2003年02期

5 余擎;成牙本質(zhì)細(xì)胞分化的分子機(jī)制[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2003年02期

6 王曉春,梁景平;成牙本質(zhì)細(xì)胞分離技術(shù)的新進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);2004年06期

7 李霞,肖明振,余擎,趙守亮,郭婷,高杰,呂昕,何文喜;腫瘤壞死因子受體相關(guān)分子6在成牙本質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的研究[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年03期

8 王捍國(guó);肖明振;趙守亮;郝建軍;余擎;;永生化人成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞系的生物學(xué)特征[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年01期

9 吳禮安;文玲英;楊富生;王小競(jìng);方軍;;成牙本質(zhì)細(xì)胞中上游刺激因子1的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位及轉(zhuǎn)位研究[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2007年09期

10 吳禮安;文玲英;楊富生;王小競(jìng);;成牙本質(zhì)細(xì)胞中上游刺激因子1對(duì)骨橋素表達(dá)調(diào)控的研究[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2007年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田衛(wèi)東;謝家敏;劉磊;湯煒;鄭曉輝;李聲偉;;人類牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究[A];2007年第七次全國(guó)牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

2 郝玉慶;王國(guó)荃;劉開泰;;過量氟對(duì)培養(yǎng)人牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞合成分泌Ⅰ型膠原的影響[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2002年

3 王曉春;梁景平;李昊妍;張秀麗;宋愛梅;陳穎;郭炳詩;;成人成牙本質(zhì)細(xì)胞原位培養(yǎng)模型的建立[A];2007年第七次全國(guó)牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

4 謝家敏;田衛(wèi)東;陳希哲;鄭曉輝;湯煒;劉磊;;體外誘導(dǎo)人牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞分化[A];2004年中國(guó)口腔頜面修復(fù)重建外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

5 呂海鵬;史俊南;趙守亮;Athony J.Smith;;人成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型特異性基因的表達(dá)、純化和多克隆抗體的制備[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

6 呂海鵬;史俊南;趙守亮;Athony J．Smith;;人成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞L型鈣離子通道α_1亞基D亞型特異性基因的表達(dá)、純化和多克隆抗體的制備[A];2007年第七次全國(guó)牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

7 楊國(guó)斌;袁國(guó)華;陳碩;;BMP2調(diào)控DSPP基因轉(zhuǎn)錄由DLX3/OSX信號(hào)通路介導(dǎo)[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

8 李玉成;于金華;史俊南;金巖;;利用結(jié)合有TGF-β1的微孔濾膜離體誘導(dǎo)成牙本質(zhì)細(xì)胞分化的研究[A];2007年第七次全國(guó)牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

9 李適廷;姚乃暉;余擎;孔輝;朱慶林;倪龍興;;Runx2調(diào)控小鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞分化以及牙本質(zhì)形成的研究[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

10 呂海鵬;趙守亮;史俊南;Athony J.Smith;;人成牙本質(zhì)細(xì)胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型特異性基因的原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定[A];全國(guó)第三次牙體牙髓病學(xué)臨床技術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 殷霄;分化轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子Hey1在成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞發(fā)生中的作用及其機(jī)制的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

2 王捍國(guó);永生化人成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)和功能學(xué)特征分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

3 姜永;成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子18對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞分化的作用及信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

4 張光東;大鼠頜突外胚間充質(zhì)干細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化[D];中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 韓娜娜;β-catenin在牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中的作用機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2014年

6 李鵬;新型機(jī)械敏感離子通道Piezo在成牙本質(zhì)細(xì)胞表達(dá)和功能研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 許莉莉;KLF4在人成牙本質(zhì)細(xì)胞分化中的作用[D];武漢大學(xué);2011年

8 李霞;TRAF6對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞功能的調(diào)控作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 黃欣;成牙本質(zhì)細(xì)胞分化中microRNA靶向調(diào)控牙本質(zhì)涎磷蛋白基因的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

10 王鋒;BMP2調(diào)控成牙本質(zhì)細(xì)胞分化經(jīng)由Dlx3-Osx-GCN5信號(hào)通路介導(dǎo)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳煜;過量氟對(duì)大鼠牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響及免疫組化的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2005年

2 宋瑋;人成牙本質(zhì)細(xì)胞的分離和鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 李娜;納米羥基磷灰石顆粒尺度及濃度對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞增殖和成礦的影響[D];浙江大學(xué);2012年

4 李鵬;氟化物誘導(dǎo)成牙本質(zhì)細(xì)胞凋亡的相關(guān)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 段晴月;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞的體內(nèi)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 安倩;Calbindin-D28k與肌動(dòng)蛋白在牙胚、牙髓組織中的分布及相互關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

7 胡楠;TLR9信號(hào)途徑在成牙本質(zhì)細(xì)胞中作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 趙穎煊;人成牙本質(zhì)細(xì)胞L型鈣離子通道α_1亞基D亞型特異性基因的克隆研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

9 車兆暢;L型鈣離子通道對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

10 張淳;不同齲深狀態(tài)下人成牙本質(zhì)細(xì)胞的凋亡及凋亡蛋白Bcl-2，，Bax的表達(dá)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號(hào)：1146383