本文關鍵詞：二甲雙胍通過miR-26a下調(diào)Mcl-1誘導人口腔癌細胞凋亡

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【摘要】：目的:以人口腔癌KB細胞為研究對象,研究二甲雙胍對人口腔癌KB細胞體外增殖及凋亡的影響,并探討二甲雙胍對細胞影響的初步作用機制。方法:1.細胞經(jīng)二甲雙胍處理24 h后,在倒置顯微鏡下觀察KB細胞生長和形態(tài)學的變化。MTT法檢測細胞存活率,平板克隆觀察二甲雙胍對口腔癌細胞體外克隆形成能力的影響;2.KB細胞分組處理后,采用線粒體膜電位檢測試劑盒檢測細胞內(nèi)線粒體膜電位的變化情況;Annexin V-FITC/PI染色方法檢測二甲雙胍對KB細胞凋亡的影響;Western blot檢測二甲雙胍對KB細胞內(nèi)Mcl-1,Bim,Bax及caspase-3蛋白的影響;3.cDNA Mcl-1上調(diào)Mcl-1后,MTT,JC-1觀察上調(diào)Mcl-1二甲雙胍對KB細胞增殖及凋亡的影響;Western blot法檢測口腔癌細胞中Mcl-1,Bim,Bax及caspase-3蛋白表達的變化;4.qRT-PCR檢測二甲雙胍處理KB細胞后miR-26a表達水平的變化;5.轉(zhuǎn)染miR-26a后,集落克隆實驗和PI單染實驗分別用于檢測KB細胞過表達miR-26a后,二甲雙胍對轉(zhuǎn)染mir-26a的KB細胞體外增殖及凋亡的影響是否發(fā)生變化,隨后,再用蛋白印跡法檢測Mcl-1表達的變化。結(jié)果:1.不同濃度的二甲雙胍對人口腔癌KB細胞體外增殖及凋亡的影響1)形態(tài)學結(jié)果顯示,經(jīng)不同濃度二甲雙胍處理后,KB細胞可出現(xiàn)形態(tài)變圓,體積縮小,部分細胞發(fā)生邊集并破裂成細胞碎片等顯著的形態(tài)學變化。隨著二甲雙胍濃度的增加貼壁細胞數(shù)目逐漸減少,漂浮細胞逐漸增多;2)MTT細胞活力檢測結(jié)果顯示,二甲雙胍可降低人口腔癌KB細胞的活力。與對照組相比,二甲雙胍處理組的細胞活力明顯降低,并呈現(xiàn)藥物濃度和時間依賴的關系;3)平板克隆形成實驗顯示二甲雙胍可顯著抑制kb細胞的克隆形成能力;4)annexinv-fitc/pi染色顯示二甲雙胍能誘導細胞發(fā)生凋亡,并呈濃度依賴性。5)jc-1熒光檢測,紅綠熒光的相對比例降低,提示線粒體膜電位下降;6)westernblot結(jié)果表明二甲雙胍能顯著下調(diào)口腔癌細胞中mcl-1的表達,上調(diào)bim、bax的表達水平,并誘導caspase-3的活化。2.過表達mcl-1能夠降低口腔癌kb細胞對二甲雙胍的敏感性1)cdnamcl-1轉(zhuǎn)染效率的檢測將cdnamcl-1和空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進入口腔癌細胞kb中,westernblot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染cdnamcl-1組中mcl-1表達明顯升高;2)cdnamcl-1轉(zhuǎn)染降低口腔癌細胞對二甲雙胍的敏感性mtt結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染cdnamcl-1后kb細胞的存活率較未轉(zhuǎn)染細胞明顯提高,提示cdnamcl-1降低了kb細胞對二甲雙胍的敏感性;jc-1結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染cdnamcl-1能抑制二甲雙胍引起的線粒體膜電位的下降。westernblot表明mcl-1的高表達抑制了kb細胞在二甲雙胍作用下細胞內(nèi)bax及bim蛋白的表達和caspase-3的活性。3.二甲雙胍對kb細胞mir-26a的調(diào)節(jié)及mir-26a對細胞增殖凋亡的影響1)與對照組相比,二甲雙胍可明顯上調(diào)細胞中mir-26a的表達水平;2)用mir-26a的模擬物和抑制物分別轉(zhuǎn)染kb細胞,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染mir-26a模擬物后,與二甲雙胍單獨處理組相比較,kb細胞的增殖受到明顯抑制,而mir-26a的抑制物則出現(xiàn)相反的結(jié)果。進一步試驗發(fā)現(xiàn),mir-26a的模擬物轉(zhuǎn)染kb細胞后,mcl-1水平明顯降低,且細胞凋亡率明顯增加。結(jié)論:1.二甲雙胍能顯著抑制kb細胞的增殖并且誘導細胞凋亡;2.上調(diào)mcl-1后能降低口腔癌kb細胞對二甲雙胍的敏感性;3.二甲雙胍刺激口腔癌KB細胞后上調(diào)miR-26a的表達;4.二甲雙胍對口腔癌增殖及凋亡的影響可能與二甲雙胍上調(diào)miR-26a表達有關。
【關鍵詞】：口腔癌 二甲雙胍 凋亡 Mcl-1 miR-26a
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.8
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 引言11-13
• 材料與儀器13-16
• 方法16-28
• 結(jié)果28-38
• 討論38-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-46
• 致謝46-47
• 附錄A47-48
• 附錄B48-52
• 附錄C52-53
• 綜述53-60
• 參考文獻58-60

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