本文關(guān)鍵詞：新型底涂—沖洗劑提高自酸蝕粘接劑的牙本質(zhì)粘接持久性的研究

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【摘要】：第一部分新型底涂-沖洗劑對自酸蝕粘接劑的短期和長期牙本質(zhì)粘接強度的影響目的：研究含有酸性功能單體MDP和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)抑制劑(苯扎氯銨(BAC)、聚乙烯磷酸(PVPA)、原花青素(PA))的新型底涂-沖洗劑處理牙本質(zhì)后,對自酸蝕粘接劑的短期和長期牙本質(zhì)粘接強度和樹脂-牙本質(zhì)界面微觀形態(tài)的影響。材料和方法：用MDP和MMPs抑制劑配制8種底涂-沖洗劑(5%MDP, 5%MDP-BAC,5%MDP-PVPA,5%MDP-PA,15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA,15%MDP-PA(wt);其中BAC,PVPA和PA分別為1%wt,1000μg/ml和15%PA)。將54顆離體牙隨機分為9組,每組6顆牙齒。用IsometTM低速切割機將離體牙垂直于牙冠長軸冠牙合中1/3處切開,暴露牙本質(zhì)表面后用320#SiC打磨制備統(tǒng)一的玷污層。將實驗組底涂-沖洗劑(5%MDP,5%MDP-BAC,5% MDP-PVPA,5%MDP-PA; 15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA,15% MDP-PA)涂布于牙本質(zhì)表面30s,水沖洗30s,氣槍輕吹,而對照組不用底涂-沖洗劑處理。再用自酸蝕粘接劑Clearfil S3 Bond(可樂麗公司,日本)涂于牙本質(zhì)表面20s,強吹5s,光固化(Radii plus,澳大利亞南方牙科工業(yè)有限公司)10 s,用復合樹脂Clearfil Majesty(可樂麗公司,日本)分4層充填,每層厚度1mm,每次光固化40s。將樣本置于37℃水儲存24小時后,用低速切割儀把樣本制成約1*1*8mm牙本質(zhì)樹脂條。來自同一顆牙齒的牙本質(zhì)樹脂條再隨機分為即刻組(24h)和長期組(1y),水儲存24h和1年后分別進行微拉伸強度(MTBS)測試實驗。體視顯微鏡下觀察所有斷裂樣本進行斷裂模式分析。每組8個樣本條用于掃描電鏡觀察樹脂-牙本質(zhì)界面的微觀形態(tài)。將36顆離體牙隨機分為9組,用低速切片機將牙冠切開,暴露冠中1/3牙本質(zhì),切取厚度0.7mm的牙本質(zhì)片(每組2顆牙,6個牙本質(zhì)片),樣本制備同前,然后將樣本制備超薄切片并透射電鏡(TEM)觀察。數(shù)據(jù)用SPSS 22.0軟件處理,用析因設(shè)計方差分析和LSD多重比較進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果：除5%MDP-BAC組外,低濃度MDP組(5%MDP,5%MDP-PVPA, 5%MDP-PA)均未能增加短期牙本質(zhì)MTBS(P0.05)。高濃度MDP組(15%MDP, 15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA和15%MDP-PA)和5%MDP-BAC組的短期牙本質(zhì)MTBS與對照組相比有顯著性的提高(P0.05)。實驗組的長期牙本質(zhì)MTBS均顯著高于對照組(P0.05)。其中15%MDP-BAC組的長期MTBS與15%MDP-PVPA組相比無明顯差異(P0.05),但前者顯著高于其他組(P0.05)。對照組經(jīng)過1年水儲存后MTBS顯著降低(P0.05)。而實驗組MTBS未見明顯改變(P0.05)。SEM長期樣本觀察到對照組樹脂-牙本質(zhì)界面出現(xiàn)裂隙,而實驗組復合樹脂與牙本質(zhì)結(jié)合緊密。底涂-沖洗牙本質(zhì)表面后,牙本質(zhì)表面玷污層大部分被去除。TEM長期樣本觀察到對照組玷污層內(nèi)部出現(xiàn)微裂隙,實驗組牙本質(zhì)混合層與短期相比無明顯改變,可見粘接劑層、少無結(jié)構(gòu)層和混合層。在混合層中可見大量針狀羥基磷灰石晶體。結(jié)論：應(yīng)用新型底涂-沖洗劑5%MDP-BAC、15%MDP、15%MDP-BAC、 15%MDP-PVPA或15%MDP-PA可以顯著增強自酸蝕粘接劑的牙本質(zhì)短期和長期粘接強度,且使長期牙本質(zhì)粘接強度至少一年不降低。底涂-沖洗方法(prime--rinse approach)是現(xiàn)在自酸蝕類粘接劑使用方法的一種全新補充。第二部分新型底涂-沖洗劑對基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制作用目的：研究新型底涂-沖洗劑是否具有抑制MMPs的作用以及抑制強度。材料和方法：實驗前,用10μg/ml胰蛋白酶與rhMMP-8或-9混合培養(yǎng)2小時以激活rhMMP-8和-9(Biolegend,圣地亞哥,美國),每組重復4次,用96孔板進行實驗。每個實驗混合溶液(100μl)孔中加入：2μ1 rhMMP-8或-9(19.6 ng/孔),10μl底涂-沖洗劑(5%MDP,5%MDP-BAC,5%MDP-PVPA,5%MDP-PA, 15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA或15%MDP-PA),50μ1含硫多肽基質(zhì)溶液(Sensolyte通用型MMP比色試劑盒提供,AnaSpec,菲蒙,美國)和38μl緩沖液。對照組包括：實驗混合液對照組加一種10μl底涂-沖洗劑；陽性對照組加2μl rhMMP-8或-9;抑制劑對照組加2μl rhMMP-8或-9和10μl濃度為20μM的一種MMPs抑制劑GM6001(又稱為加拉定,由Sensolyte比色試劑盒提供)；基質(zhì)對照組加50 μl緩沖液。每個對照組加入適量緩沖液使體積達到50μl后,再加入50μl含硫多肽基質(zhì)溶液使每個對照組總體積也達到100μl。每孔溶液混合后用酶標儀每隔10 min在412 nm處讀數(shù),共6次,得出吸光度均數(shù)后再計算,公式為：基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制率=1一(實驗混合溶液的吸光度—實驗混合液對照組的吸光度)/(陽性對照組的吸光度—基質(zhì)對照組的吸光度)。計算出的抑制率用單因素方差分析和Tukey多重比較,顯著水平為0.05。結(jié)果：5%MDP底涂-沖洗劑對rhMMP-8,9的抑制率均顯著低于其他7個底涂-沖洗劑組和對照組GM6001對rhMMP-8,9的抑制率(P0.05)。其余7組底涂-沖洗劑對rhMMP-9的抑制率與對照組GM6001對rhMMP-9的抑制率相比無顯著差異(P0.05)。15%MDP-PVPA和15%MDP-PA底涂劑組對rhMMP-8的抑制率顯著高于GM6001對rhMMP-8的抑制率(P0.05)。結(jié)論：新型添加MMPs抑制劑的底涂-沖洗劑均具有顯著抑制MMPs的作用。第三部分新型底涂-沖洗劑對自酸蝕粘接劑的牙本質(zhì)粘接耐酶解性能的影響目的：研究新型底涂-沖洗劑(15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA)對自酸蝕類粘接劑酶解前后的牙本質(zhì)粘接強度和樹脂-牙本質(zhì)界面微觀形態(tài)的影響。材料和方法：將108顆離體牙隨機分為12組：3種粘接劑(AdperTM Easy One,3M ESPE,美國;i Bond,Heraeus Kulzer GmbH,德國;G-Bond,GC,日本),每種粘接劑36顆牙齒；每種粘接劑根據(jù)底涂劑不同分為1個對照組,3個實驗組(15%MDP,15%MDP-BAC,15%MDP-PVPA),每個亞組9顆牙齒。用低速切割機暴露離體牙冠牙合中1/3的牙本質(zhì)表面,然后用320#SiC打磨制備統(tǒng)一的玷污層。實驗組將底涂劑分別涂布于牙本質(zhì)表面30s,水沖洗10s,輕吹,而對照組不用底涂-沖洗劑處理牙本質(zhì)表面,再按使用說明分別涂布自酸蝕粘接劑(AdperTM Easy One,i Bond,G-Bond),光固化,再分別用同一廠家復合樹脂(FiltekTM250, Solitaire2,GC Gradia Direct)分層充填,每層厚度1mm,共4層,每次光固化40s。將所有樣本置于37℃自來水中24小時后,用低速切割儀把樣本切割成約1*1*8mm牙本質(zhì)樹脂條,來自同一顆牙齒的牙本質(zhì)樹脂條再隨機分為三組：即刻組、I型和II型膠原酶處理組后,即刻組樣本進行微拉伸強度測試,I型、II型膠原酶組的樣本分別在2mg/ml I型和II型膠原酶(Sigma-Aldrich,美國)溶液儲存24小時后進行MTBS測試,并計算微拉伸強度。將72顆離體牙隨機分為12組(每種粘接劑24顆牙齒,每個亞組6顆牙齒),用IsometTM低速切割機垂直于牙冠長軸切開,暴露冠中1/3牙本質(zhì),切取厚度為0.7mm的牙本質(zhì)片,樣本制備同前,再用透射電鏡觀察樹脂-牙本質(zhì)界面的微觀形貌。用SPSS22.0軟件處理,析因設(shè)計方差分析和LSD多重比較進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果：三種自酸蝕類粘接劑的即刻微拉伸強度按從大到小順序排列如下：AdperTM Easy Onei BondG-Bond(P0.01)。三個實驗組(MDP,MDP-BAC, MDP-PVPA)的即刻MTBS均顯著高于對照組(P0.05),而在同一種粘接劑中的三個實驗組之間并沒有顯著差異(P0.05)。三種自酸蝕類粘接劑的對照組在經(jīng)過I型膠原酶和II型膠原酶酶解后,MTBS均顯著降低(P0.05),實驗組酶解后MTBS仍顯著高于對照組(P0.005)。三種底涂劑的耐酶解能力按從大到小順序排列如下：MDP-BACMDP-PVPAMDP.TEM觀察發(fā)現(xiàn)對照組經(jīng)過膠原酶酶解后,玷污層內(nèi)部出現(xiàn)微裂隙,部分牙本質(zhì)膠原基質(zhì)松解游離,實驗組酶解后的牙本質(zhì)混合層相對完整,未見明顯裂隙,混合層可見大量針狀羥基磷灰石晶體。結(jié)論：用新型底涂-沖洗劑(MDP,MDP-BAC,MDP-PVPA)處理牙本質(zhì)能夠顯著提高自酸蝕粘接的牙本質(zhì)粘接強度和耐酶解能力,其中MDP-BAC組的耐酶解能力最強,為提高牙本質(zhì)粘接的持久性提供實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：牙本質(zhì)粘接 自酸蝕粘接劑 持久性 基質(zhì)金屬蛋白酶 微拉伸強度 透射電鏡
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R783.1
【目錄】：

• 致謝5-7
• 序言7-10
• 中文摘要10-14
• ABSTRACT14-20
• 英文縮略詞20-23
• 1 新型底涂-沖洗劑對自酸蝕粘接劑的短期和長期牙本質(zhì)粘接強度的影響23-47
• 1.1 引言23-27
• 1.2 材料與方法27-30
• 1.3 實驗結(jié)果30-42
• 1.4 討論42-46
• 1.5 結(jié)論46-47
• 2 新型底涂-沖洗劑對基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制作用47-55
• 2.1 引言47-49
• 2.2 材料和方法49-50
• 2.3 實驗結(jié)果50-51
• 2.4 討論51-53
• 2.5 結(jié)論53-55
• 3 新型底涂-沖洗劑對自酸蝕粘接劑的牙本質(zhì)粘接酶解性能的影響55-75
• 3.1 引言55-57
• 3.2 材料與方法57-59
• 3.3 實驗結(jié)果59-71
• 3.4 討論71-73
• 3.5 結(jié)論73-75
• 全文總結(jié)75-76
• 參考文獻76-90
• 綜述90-125
• 參考文獻104-125
• 作者簡歷及在讀期間所取得的科研成果125-126

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